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士鋒生物細(xì)菌淀粉酶和過(guò)氧化氫酶定性實(shí)驗(yàn)及其生化特征觀察
最近更新時(shí)間：2014-4-3
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一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^(guò)對(duì)淀粉酶和過(guò)氧化氫酶的定性測(cè)定，加深對(duì)酶和酶促反應(yīng)的感性認(rèn)識(shí)二、實(shí)驗(yàn)原理酶是微生物機(jī)體內(nèi)生物合成的一種生物催化劑，它是高分子蛋白質(zhì)，具有催化生物化學(xué)反應(yīng)加速進(jìn)行，并具有傳遞電子、原子和化學(xué)基團(tuán)的作用。微生物的酶按它所在細(xì)胞的部位分為胞外酶、胞內(nèi)酶及表面酶。本實(shí)驗(yàn)對(duì)胞外酶中的兩種即淀粉酶和過(guò)氧化氫酶(亦叫接觸酶)進(jìn)行定性測(cè)定。細(xì)菌淀粉酶能將遇碘呈藍(lán)色的淀粉水解為遇碘不顯色的糊精，并進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為糖，淀粉被酶催化分解后用碘檢測(cè)不到其變色現(xiàn)象；過(guò)氧化氫酶能將過(guò)氧化氫快速分解為水和氧氣，能用肉眼很容易的觀測(cè)到產(chǎn)生的氣泡。三、儀器和材料1、試管(1 5 mm-1 50 mm)4支、試管架1個(gè)、培養(yǎng)皿(90mm)3套、接種環(huán)。2、肉膏胨、淀粉瓊脂培養(yǎng)基1瓶(約50 ml)3、0.2％淀粉溶液1滴瓶、革氏碘液1滴瓶、10％--3％過(guò)氧化氫1滴瓶。4、生活污水活性污泥混合液或枯草桿菌培養(yǎng)液一瓶?？莶輻U菌和大腸桿菌斜面各一支。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和操作方法(一)生活污水活性污泥混合液中淀粉酶的測(cè)定1．取4支干凈的試管，按1、2、3對(duì)照編號(hào)。放在試管架上備用。2．在1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)試管內(nèi)分別加入 5ml、10ml、15ml的活性污泥混合液，再在1號(hào)和2號(hào)試管中分別加10 ml和5 ml蒸餾水。在對(duì)照管內(nèi)加15 ml蒸餾水。3．在1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)及對(duì)照管中分別加入O．2％的淀粉液若干滴(淀粉液的用量，在做預(yù)備實(shí)驗(yàn)時(shí)根據(jù)樣品中淀粉酶含量多少而定)，迅速搖勻并記下反應(yīng)的初始時(shí)間。4．在上述4個(gè)管內(nèi)分別加若干滴碘液(碘液用量在預(yù)備實(shí)驗(yàn)時(shí)酌定)，迅速搖勻，這時(shí)各管均呈藍(lán)色。5．觀察結(jié)果。注意各管的變化，記下各管藍(lán)色*消失時(shí)的時(shí)間(即淀粉酶和淀粉反應(yīng)*的時(shí)間)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。(二)細(xì)菌淀粉酶在固體培養(yǎng)基中的擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)1．將肉膏胨淀粉瓊脂培養(yǎng)基加熱融化，待冷至45℃左右倒人無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)(每皿約10 ml)，共倒3個(gè)，靜置待冷凝即成平板。2．在無(wú)菌操作條件下，用接種環(huán)分別挑取枯草桿菌、大腸桿菌和活性污泥各一環(huán)分別在3個(gè)平板上點(diǎn)種5個(gè)點(diǎn)。倒置于37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24～48 h。3．觀察結(jié)果，取出平板，分別在3個(gè)平板內(nèi)菌落周?chē)渭拥庖海^察菌落周?chē)伾淖兓?。若在菌落周?chē)幸粋€(gè)無(wú)色的透明圈，說(shuō)明該細(xì)菌產(chǎn)生淀粉酶并擴(kuò)散到基質(zhì)中去。若菌落周?chē)詾樗{(lán)色，說(shuō)明該細(xì)菌不產(chǎn)生淀粉酶。(三)過(guò)氧化氫酶的定性測(cè)定1．將配備的枯草桿菌和大腸桿菌斜面各1支放在試管架上。2．用滴管吸取過(guò)氧化氫滴加入兩管菌種斜面上，有氣泡產(chǎn)生的為接觸酶陽(yáng)性(有過(guò)氧化氫酶)；無(wú)氣泡產(chǎn)生的為接觸酶陰性(無(wú)過(guò)氧化氫酶)。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果把所觀察到的現(xiàn)象記錄下來(lái)，進(jìn)行分析。六、思考題1．淀粉酶定性測(cè)定中對(duì)照應(yīng)呈什么顏色?為什么?各菌落呈什么顏色?為什么? 2．各菌落滴加過(guò)氧化氫后呈什么現(xiàn)象?說(shuō)明什么問(wèn)題?