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士鋒生物總糖和還原糖的測定:3,5－二硝基水楊酸法
最近更新時間：2014-4-28
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大?。?/span>14.3KB
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3,5－二硝基水楊酸（DNS）試劑：稱取6.5g DNS溶于少量熱蒸餾水中，溶解后移入1000mL容量瓶中，加入2mol/L氫氧化鈉溶液325mL，再加入45g丙三醇，搖勻，冷卻后定容至1000mL。
葡萄糖標準溶液：準確稱取干燥恒重的葡萄糖200mg，加少量蒸餾水溶解后，以蒸餾水定容至100mL，即含葡萄糖為2.0mg/mL。
6mol/L HCl：取250mL濃HCl（35%～38%）用蒸餾水稀釋到500mL。
碘－碘化鉀溶液：稱取5g碘，10g碘化鉀溶于100mL蒸餾水中。
6mol/L NaOH：稱取120g NaOH溶于500mL蒸餾水中。
0.1% 酚酞指示劑。
二、材料
藕粉，淀粉。
三、器材
試管1.5×15cm（×13）, 3.0×20cm（×1）；移液管0.2mL（×2），0.5mL（×2），1mL（×5）， 10mL（×1）；水浴鍋；電爐；分光光度計。
操作方法
一、葡萄糖標準曲線制作
取6支1. 5 cmm×1.5cm試管，按下表加入2.0mg/mL葡萄糖標準液和蒸餾水。
管號
葡萄糖標準液（mL）
蒸餾水(mL)
葡萄糖含量(mg/mL)
A540
0
0
1
0
1
0.2
0.8
0.4
2
0.4
0.6
0.8
3
0.6
0.4
1.2
4
0.8
0.2
1.6
5
1
0
2
在上述試管中分別加入DNS試劑2.0mL，于沸水浴中加熱2min進行顯色，取出后用流動水迅速冷卻，各加入蒸餾水9.0mL，搖勻，在540nm波長處測定光吸收值。以葡萄糖含量（mg/mL）為橫坐標，光吸收值為縱坐標，繪制標準曲線。