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士鋒生物植物組織中總糖及還原糖的測(cè)定
最近更新時(shí)間：2014-5-7
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大?。?/span>50.6KB
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1、還原糖：指含有游離的半縮醛(酮)基糖。
單糖都是還原糖；某些二糖是還原糖（如麥芽糖、乳糖等）；多糖為非還原糖。
2、總糖的提取及雙、多糖的酸水解。
利用糖的溶解度不同，可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來(lái)，對(duì)沒(méi)有還原性的雙糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有還原性的單糖進(jìn)行測(cè)定，再分別求出樣品中還原糖和總糖的含量（還原糖以葡萄糖含量計(jì)）。
3、還原糖與3,5-二硝基水楊酸(DNS)試劑反應(yīng)：
在堿性條件下，還原糖與DNS試劑反應(yīng)，還原糖被氧化成糖酸及其它產(chǎn)物，DNS被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。
4、在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與棕紅色物質(zhì)(3-氨基-5-硝基水楊酸)顏色的深淺成正比關(guān)系，利用分光光度計(jì)，在540nm波長(zhǎng)下測(cè)定光密度值，查對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算，便可求出樣品中還原糖的含量。由于多糖水解為單糖時(shí)，每斷裂一個(gè)糖苷鍵需加入一分子水，所以在計(jì)算多糖含量時(shí)應(yīng)乘以0.9。
三、實(shí)驗(yàn)材料、儀器和試劑：
1、實(shí)驗(yàn)材料：食用面粉、大豆葉片
2、儀器：水浴鍋；可見(jiàn)分光光度計(jì)等。
3、試劑：
（1）500μg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液
（2）3,5-二硝基水楊酸（DNS）試劑(堿性)
（3）6M HCl和6M NaOH
四、實(shí)驗(yàn)步驟：
1、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:取7支試管，按下表操作，以標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖含量為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的吸光值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2、還原糖的提取
①取0.5g樣品于研缽中，加水2-3ml，充分研磨。
②用15ml蒸餾水分三次沖洗研缽，轉(zhuǎn)入50ml錐形瓶中。
③在50℃水浴中恒溫20分鐘，冷卻后于3000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
④取上清轉(zhuǎn)入50ml容量瓶中，用蒸餾水定容，待測(cè)。
3、總糖的水解及提取
①取0.5g樣品于研缽中，加水2ml，充分研磨。
②用6ml蒸餾水分三次沖洗研缽，轉(zhuǎn)入50ml錐形瓶中。
③向錐形瓶中加入10mL 6M HCl，沸水浴30分鐘，冷卻后，用6mol/LNaOH調(diào)pH值至中性，于3000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
④取上清轉(zhuǎn)入100ml容量瓶中，用蒸餾水定容，待測(cè)。
4、樣品含糖量的測(cè)定:
取提取液0.5ml，按上表操作。