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士鋒生物轉(zhuǎn)氨酶活性的測(cè)定
最近更新時(shí)間：2014-5-16
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大?。?/span>50.6KB
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轉(zhuǎn)氨酶是體內(nèi)重要的一類酶。轉(zhuǎn)氨酶催化α–氨基酸的α–氨基與α–酮酸的α–酮基之間的相互轉(zhuǎn)化，從而生成一種新的氨基酸與一種新的酮酸，這種作用稱為轉(zhuǎn)氨基作用。
它在生物體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成、分解等中間代謝過(guò)程中，在糖、脂及蛋白質(zhì)三大物質(zhì)代謝的相互、相互制約及相互轉(zhuǎn)變上都起著很重要的作用。
在動(dòng)物機(jī)體中活力zui強(qiáng)、分布zui廣的轉(zhuǎn)氨酶有兩種：一種為谷氨酸丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶（簡(jiǎn)稱GPT），另一種為谷氨酸草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶（簡(jiǎn)稱GOT）。它們的催化反應(yīng)如下：
GOT催化生成的草酰乙酸在檸檬酸苯胺的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)楸崤c二氧化碳。由上可見(jiàn)此反應(yīng)zui終產(chǎn)物都是丙酮酸。測(cè)定單位時(shí)間內(nèi)丙酮酸的產(chǎn)量即可得知轉(zhuǎn)氨酶的活性。
丙酮酸可與2,4 – 二硝基苯肼反應(yīng)，形成丙酮酸二硝基苯腙，在堿性溶液中顯棕紅色。再與同樣處理的丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行比色，計(jì)算出其含量，以此測(cè)定轉(zhuǎn)氨酶的活性。
丙酮酸 + 2,4 – 二硝基苯肼→丙酮酸二硝基苯腙（棕紅色）
轉(zhuǎn)氨酶的活性單位為：每毫升血清與基質(zhì)在37℃下作用60min，生成1μmol丙酮酸為1個(gè)單位。
（二）試 劑
1．磷酸鹽緩沖液（pH7.4）：
甲液：1/15 mol/L磷酸氫二鈉溶液：稱取磷酸氫二鈉（Na2HPO4）9.47g（或Na2HPO4·12H2O 23.87g）溶于蒸餾水，定容至1 000 ml。
乙液：1/15 mol/L磷酸二氫鉀溶液：稱取磷酸二氫鉀（KH2PO4）9.078g，溶于蒸餾水，定容至1 000 ml。
取甲液825 ml，乙液175 ml，混合，測(cè)其pH為7.4即可使用。
2．GPT基質(zhì)液：稱取a – 酮戊二酸29.2 mg及DL – 丙氨酸1.78g，溶于pH7.4的磷酸鹽緩沖液20ml 中，溶解后再加緩沖液70ml, 并移入100ml容量瓶?jī)?nèi)。加1mol/L的NaOH溶液0.5ml，校正pH至7.4。再以pH7.4的磷酸緩沖液定容至100ml。貯存于冰箱備用，可用1周。
3．GOT基質(zhì)液：稱取a – 酮戊二酸29.2 mg及DL – 天冬氨酸2.66g，溶于pH7.4的磷酸鹽緩沖液20ml 中，溶解后再加緩沖液70ml, 并移入100ml容量瓶?jī)?nèi)。加1mol/L的NaOH溶液0.5ml，校正pH至7.4。再以pH7.4的磷酸緩沖液定容至100ml。貯存于冰箱備用，可用1周。
4. 2,4 – 二硝基苯肼溶液：稱取2,4 – 二硝基苯肼20mg，先溶于10ml濃鹽酸中（可加熱助溶），再以蒸餾水稀釋至100ml（有沉渣可過(guò)濾），棕色瓶?jī)?nèi)保存。