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士鋒生物醋酸纖維膜電泳
最近更新時間：2014-6-3
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大?。?/span>50.6KB
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醋酸纖維膜電泳是一項簡便而又迅速的方法。它的優(yōu)點是：①電泳區(qū)帶分離清楚，比瓊脂平板電泳分辨率高；②可以定量；③樣品用量少，只需要幾微升即可。
（一）材料與試劑
1．pH8.6離子強度0.05巴比妥緩沖液
2．0.5％氨基黑染色液
3．透明液：
冰醋酸 3 份
95％乙醇 2 份
混合即可
4．醋酸纖維膜
（二）操作方法
1．將醋酸纖維膜條浸于巴比妥緩沖液中，浸透后用竹鑷子夾到濾紙上，吸去過多的水分。將膜的光滑面向下搭在電泳槽兩側(cè)的濾紙橋上，注意搭平。
2．加樣 用微量加樣器于負(fù)1.5cm處加樣1µl～3µl，注意樣品要成一條直線且垂直方向。也可用血球計數(shù)板蓋玻片蘸取樣品輕輕點上。
3．電泳 電壓10V/cm～15V/cm或0.4mA/cm～0.6mA/cm電泳45min～60min，至電泳區(qū)帶展開約2.5cm～3.5cm時，關(guān)閉電源。
4．染色 將膜浸于氨基黑染色液中，染色數(shù)分鐘。
5．透明 將染色的醋酸纖維膜浸于透明液中，漂洗5min ~10min，至背景呈乳白色為止。為了防止膜上出現(xiàn)許多氣泡，可以逐漸升高透明液濃度10％、20％以至30％。
6．結(jié)果觀察及保存 透明后，將膜貼于玻璃上，干后取下，即可觀察結(jié)果并保存。
7．定量 將各區(qū)帶剪下，分別浸于4Mol/L NaOH 4ml中，振搖數(shù)次，約2h，色澤被浸出，于580nm～620nm比色，測出各區(qū)帶的OD值。同時剪一塊大小相似無蛋白的透明膜同樣處理，做為對照。
計算各區(qū)帶蛋白含量百分比（以血清為例）
總OD值T＝A+α1+α2+β+γ
白蛋白％=A/T×100％
以此類推。
（三）注意事項
1．醋酸纖維膜孔隙小，含水量少，且較薄，因此它對熱很敏感，故應(yīng)注意控制電壓、電流。
2．樣品不可過多，只需幾微升即可。
3．加樣一定要呈直線、垂直、分布均勻，這樣泳動的區(qū)帶整齊、不歪。
4．注意醋酸纖維膜的質(zhì)量，浸泡很久仍有大塊白色硬點者可棄之不用。