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士鋒生物血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳
最近更新時(shí)間：2014-6-5
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大小：50.6KB
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帶電粒子在電場(chǎng)中向與其電性相反的電極泳動(dòng)的現(xiàn)象稱為電泳。血清中各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)大多在pH4.0～7.3之間，在pH8.6的緩沖液中均帶負(fù)電荷，在電場(chǎng)中都向正極移動(dòng)。由于血清中各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同，因此在同一pH環(huán)境中所帶負(fù)電荷多少不同，又由于其分子大小不同，所以在電場(chǎng)中泳動(dòng)速度也不同。分子小而帶電荷多者，泳動(dòng)速度較快；反之，則泳動(dòng)速度較慢。因此通過電泳可將血清蛋白質(zhì)分為5條區(qū)帶，從正依次分為清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β-球蛋白和γ球蛋白等，經(jīng)染色可計(jì)算出各蛋白質(zhì)含量的百分?jǐn)?shù)。
醋酸纖維素薄膜電泳具有微量、快速、簡(jiǎn)便 、分辨率高等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于血清蛋白、血紅蛋白、糖蛋白、脂蛋白、結(jié)合球蛋白、同工酶的分離和測(cè)定。
【器材】
醋酸纖維素薄膜（2cm×8cm）、培養(yǎng)皿、濾紙、無齒鑷、剪子、加樣器（可用蓋玻片或X膠片或微量加樣器）、直尺、鉛筆、玻璃板（8cm×12cm）、試管、試管架、吸管、電泳儀、電泳槽、分光光度計(jì)或吸光度掃描計(jì)。
【試劑】
1. 巴比妥緩沖液(pH8.6，0.07mol/L，離子強(qiáng)度0.06) 稱取巴比妥鈉12.76g、巴比妥1.66g，加500毫升蒸餾水，加熱溶解。待冷至室溫后，再加蒸餾水至1000毫升。
2. 氨基黑10B染色液 稱取氨基黑10B 0.5g加入冰醋酸10ml、甲醇50ml,混勻，加蒸餾水至100ml。
3. 漂洗液 甲醇45ml、冰醋酸5ml，混勻后加蒸餾水至100ml。
4. 洗脫液 0.4mol／LNaOH溶液。
5. 透明液 稱取檸檬酸21g，N-甲基-2-吡咯烷酮150g，以蒸餾水溶解并稀釋至500ml。
【操作】
1. 準(zhǔn)備 將緩沖液加入電泳槽的兩槽內(nèi)，并使兩側(cè)的液面等高。裁剪尺寸合適的濾紙條，疊成四層貼在電泳槽的兩側(cè)支架上，一端與支架前沿對(duì)齊，另一端侵入電泳槽的緩沖液內(nèi)，使濾紙全部濕潤(rùn)，此即 “濾紙橋”（圖3-1）。
血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳
將醋酸纖維素薄膜切成2cm×8cm大小，在無光澤面的一端約1.5cm處，用鉛筆輕劃一直線，作為點(diǎn)樣位置。然后將無光澤面向下，置于盛有巴比妥緩沖液的培養(yǎng)皿中浸泡，待充分浸透（約20分鐘）即無白色斑點(diǎn)后取出，用潔凈濾紙輕輕吸去表面的多余緩沖液。
2. 點(diǎn)樣 取少量血清于玻璃板上，用加樣器取少量血清(約2～3μl)，加在點(diǎn)樣線上，待血清滲入膜內(nèi)，移開加樣器。點(diǎn)樣時(shí)應(yīng)注意血清要適量，應(yīng)形成均勻的直線，并避免弄破薄膜（圖3-2）。
血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳