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士鋒植物體內(nèi)可溶性糖含量的測(cè)定(蒽酮法)

最近更新時(shí)間:2014-6-19

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詳細(xì)介紹:

一 、目的:
糖類(lèi)物質(zhì)是構(gòu)成植物體的重要組成成分之一,也是新陳代謝的主要原料和貯存物質(zhì)。不同載培條件,不同成熟度都可以影響水果、蔬菜中糖類(lèi)的含量。因此對(duì)水果、蔬菜中可溶性糖的測(cè)定,可以了解和鑒定水果、蔬菜品質(zhì)的高低。
二、原理
糖類(lèi)遇濃硫酸脫水生成糖醛或其衍生物,反應(yīng)如下:
植物體內(nèi)可溶性糖含量的測(cè)定(蒽酮法)

糠醛或羥甲基糠醛進(jìn)一步與蒽酮試劑縮合產(chǎn)生藍(lán)綠色物質(zhì),其在可見(jiàn)光區(qū)620nm波長(zhǎng)處有zui大吸收,且其光吸收值在一定范圍內(nèi)與糖的含量成正比關(guān)系。
此法可用于單糖、寡糖和多糖的含量測(cè)定,并具有靈敏度高,簡(jiǎn)便快捷,適用于微量樣品的測(cè)定等優(yōu)點(diǎn)。

三、實(shí)驗(yàn)材料、儀器及試劑
1.材料:白菜葉、柑桔
2.儀器:分光光度計(jì) 恒溫水箱 20ml具塞刻度試管(3支) 漏斗 100ml容量瓶 刻度試管 試管架 剪刀 研缽
3.試劑:
(1)200μg/ml標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖:AR級(jí)葡萄糖100mg,蒸餾水溶解,定容至500ml。
(2)蒽酮試劑:1g蒽酮,用乙酸乙酯溶解,定容至50ml,棕色瓶避光處貯藏;
(3)濃硫酸

四、實(shí)驗(yàn)方法
1.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
取6支20ml具寒試管,編號(hào),按下表數(shù)據(jù)配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液。
在每管中均加入0.5ml蒽酮試劑,再緩慢地加入5ml濃H2SO4,搖勻后,打開(kāi)試管塞,置沸水浴中煮沸10分鐘,取出冷卻至室溫,在620nm波長(zhǎng)下比色,測(cè)各管溶液的光密度值(OD),以標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖含量為橫坐標(biāo),光密度值為縱坐標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
植物體內(nèi)可溶性糖含量的測(cè)定(蒽酮法)

2.樣品中可溶性糖的提取
稱(chēng)取1克白菜葉,剪碎,置于研缽中,加入少量蒸餾水,研磨成勻漿,然后轉(zhuǎn)入20ml刻度試管中,用10ml蒸餾水分次洗滌研缽,洗液一并轉(zhuǎn)入刻度試管中。置沸水浴中加蓋煮沸10分鐘,冷卻后過(guò)濾,濾液收集于100ml容量瓶中,用蒸餾水定容至刻度,搖勻備用。
3.糖含量測(cè)定
用移液管吸收1ml提取液于20ml具塞刻度試管中,加1ml水和0.5ml蒽酮試劑。再緩慢加入5ml濃H2SO4(注意:濃硫酸遇水會(huì)產(chǎn)生大量的熱?。?,蓋上試管塞后,輕輕搖勻,再置沸水浴中10分鐘(比色空白用2ml蒸餾水與0.5ml蒽酮試劑混合,并一同于沸水浴保溫10分鐘)。冷卻至室溫后,在波長(zhǎng)620nm下比色,記錄光密度值。查標(biāo)準(zhǔn)曲線上得知對(duì)應(yīng)的葡萄糖含量(μg)。

五、結(jié)果計(jì)算
植物體內(nèi)可溶性糖含量的測(cè)定(蒽酮法)

六、附注
(1)加濃H2SO4時(shí)應(yīng)緩慢加入,以免產(chǎn)生大量熱量而爆沸,灼傷皮膚,如出現(xiàn)上述情況,應(yīng)迅速用自來(lái)水沖洗。
(2)水浴加熱時(shí)應(yīng)打開(kāi)試管塞。

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