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實(shí)驗(yàn)中影響影響酶作用的因素
最近更新時(shí)間：2014-6-27
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【器材和試劑】
1.器材
試管及試管架、燒杯、恒溫水浴箱、冰塊、白瓷板
2.試劑
（1）0.5%淀粉液、0.2%淀粉液
（2）0.3%NaCl溶液、0.85%NaCl溶液。
（3）不同pH值緩沖液的配置：①1/15mol/LKH2PO4液：稱(chēng)取純KH2PO4 9.078g,，加蒸餾水溶解并稀釋至1000ml。②1/15mol/L Na2HPO4液：稱(chēng)取純Na2HPO4·2H2O 11.815g，加蒸餾水溶解并稀釋至1000ml。
兩液按下表比例混合均勻，即可得各pH的緩沖液。
實(shí)驗(yàn)三 影響酶作用的因素
（4）碘化鉀-碘溶液：將碘化鉀20g及碘10g溶于100ml水中。使用前稀釋10倍。
（5）1%CuSO4溶液。
（6）1%Na2SO4溶液。
【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】
（一）溫度對(duì)酶活性的影響
【實(shí)驗(yàn)原理】
由于酶是生物催化劑，其本質(zhì)是蛋白質(zhì)。因此，對(duì)溫度敏感是酶的一個(gè)重要特性，溫度對(duì)酶促反應(yīng)速度具有雙重影響。
酶作為生物催化劑，和一般催化劑一樣呈現(xiàn)出溫度效應(yīng)，一方面，升高溫度可以增加活化分子數(shù)目，提高酶促反應(yīng)速度，另一方面，當(dāng)溫度超過(guò)一定范圍時(shí)，又會(huì)加速酶蛋白的變性速度，增加了酶的熱變性。所以在較低的溫度范圍內(nèi)，升高溫度增加活化分子數(shù)目，酶反應(yīng)速度隨溫度升高而增大，加快反應(yīng)速度這一效應(yīng)起主導(dǎo)作用；但是超過(guò)一定溫度后，溫度繼續(xù)升高，酶的變性失活起主導(dǎo)作用，反應(yīng)速度反而下降。酶反應(yīng)速度達(dá)到zui大時(shí)的溫度稱(chēng)為酶的zui適溫度。在zui適溫度下，酶的反應(yīng)速度zui高。酶的zui適溫度不是一個(gè)常數(shù)，它與作用時(shí)間的長(zhǎng)短有關(guān)系。
大多數(shù)動(dòng)物酶的zui適溫度為 37～40℃，植物酶的zui適溫度為50～60℃。酶對(duì)溫度的穩(wěn)定性與其存在形式有關(guān)。有些酶的干燥制劑，雖加熱到100℃，其活性并無(wú)明顯改變，但在100℃的溶液中卻很快地*失去活性。低溫能降低或抑制酶的活性，但不能使酶失活。
本實(shí)驗(yàn)以唾液淀粉酶為例。在不同溫度下，淀粉被唾液淀粉酶水解的程度，可由水解混合物遇碘呈現(xiàn)的顏色來(lái)判斷。淀粉遇碘呈藍(lán)色。糊精按其分子的大小，遇碘可呈藍(lán)色、紫色、暗褐色或紅色。zui簡(jiǎn)單的糊精遇碘不顯顏色，麥芽糖遇碘也不顯色。
淀粉-------------→糊精-----------→麥芽糖
遇碘：藍(lán)色--------→紫色至紅色--------→碘色
【操作步驟】
1．制備稀唾液。用蒸餾水漱口，以清除食物殘?jiān)?，再含少許蒸餾水，作咀嚼動(dòng)作以刺激唾液分泌。取小漏斗1個(gè)，墊小塊薄薄的脫脂棉，直接將唾液吐入小漏斗，取得濾液，加水至9ml，混勻備用。
2．取小試管3支，編號(hào)，按下表加入各種試劑。
實(shí)驗(yàn)三 影響酶作用的因素
3．混勻后，將1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)試管分別置于沸水浴、溫水?。?7～40℃）和冰浴中5min,向各管加入稀唾液3滴，繼續(xù)在原水浴中放置5min。
4．各管取出2滴試液在白瓷板上，觀察顏色并記錄。
5．然后再將1、3兩管置37℃水浴中5 min，各管中加碘液，觀察顏色變化并分析。
（二）pH、激活劑、抑制劑對(duì)酶活性的影響
【實(shí)驗(yàn)原理】
環(huán)境pH直接影響到酶和底物的解離狀態(tài)，從而影響到酶與底物的結(jié)合和反應(yīng)速度。在某一定pH時(shí)，酶活性大zui大值，這一pH成為酶的zui適pH。環(huán)境pH高于或低于zui適pH時(shí)，酶的活性降低，遠(yuǎn)離zui適pH時(shí)，甚至?xí)?dǎo)致酶的變性失活。不同的酶zui適pH不盡相同。酶的zui適pH不是一個(gè)特征性的物理常數(shù)，對(duì)于一個(gè)酶，其zui適pH因緩沖液和底物的性質(zhì)不同而有差異。
人體多數(shù)酶的zui適pH在7.0左右。例如唾液淀粉酶的zui適pH為6.8。
實(shí)驗(yàn)三 影響酶作用的因素
使酶由無(wú)活性變?yōu)橛谢钚?，或使酶活性增加的物質(zhì)稱(chēng)為酶的激活劑，激活劑大多為金屬離子，如Mg2+、K+、Mn2+等，少數(shù)為陰離子，如Cl-等，也有許多有機(jī)化合物激活劑，如膽汁酸鹽等。凡能抑制酶促反應(yīng)的物質(zhì)，統(tǒng)稱(chēng)抑制劑。很少量的激活劑和抑制劑就會(huì)影響酶的活性，而且常具有特異性，如Cl-對(duì)唾液淀粉酶酶的活性有激活作用，Cu2+對(duì)其則有抑制作用。但激活劑和抑制劑不是的，濃度的改變可能使激活劑變成抑制劑。
本實(shí)驗(yàn)以唾液淀粉酶為例，觀察pH、激活劑和抑制劑對(duì)酶活性的影響，觀察淀粉水解的方法同前。
【操作步驟】
取試管7支，編號(hào)，按下表加入試劑
實(shí)驗(yàn)三 影響酶作用的因素
將各管混勻后，同時(shí)置于37～40℃水浴中保溫。約1min后，由第3管取出1滴置白瓷板上作碘反應(yīng)，觀察顏色，呈棕色,（如為藍(lán)色，則仍每間隔1min作一次碘反應(yīng)）。將各管取出，各加碘液2滴，搖勻，觀察并解釋其結(jié)果。