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去壁低滲法制備植物染色體標本
最近更新時間：2014-7-30
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大?。?/span>50.6KB
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一、實驗目的
掌握用去壁低滲法制備植物染色體標本的技術。
二、實驗原理
低滲法原為人類和哺乳動物染色體標本的制備方法，后引用于植物。植物根尖分生組織細胞，經(jīng)果膠酶和纖維素酶處理后，其中膠層的果膠質(zhì)及纖維素構(gòu)成的細胞壁被消化，成為游離的原生質(zhì)體。然后用低滲溶液處理，使細胞核中的染色體，向細胞質(zhì)中自然擴散，經(jīng)固定、火焰干燥、染色，即可制備出染色體長度適中、集中而不重迭、各部分形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰的優(yōu)良染色體標本。避免了壓片法的缺點，特別適于染色體小且多的植物。
三、實驗材料
各種植物種子均可用。
四、實驗器具和藥品試劑
顯微鏡、溫箱、冰箱、培養(yǎng)皿、鑷子、小瓶、載玻片、酒精燈、切片架。
秋水仙素、KCL、2.5％的果膠酶和纖維素酶混合液、甲醇、冰醋酸、Giemsa原液、磷酸緩沖液。
五、實驗方法和步驟
(一) 材料培養(yǎng) 種子在恒溫條件下發(fā)芽培養(yǎng)，待根尖長至0.5～1厘米時進行前處理。
(二) 前處理 切取0.5厘米長的根尖，用0.2％秋水仙素處理2小時，或用 0.002M 8-羥基喹啉處理2～4小時。
(三)前低滲 吸干預處理液，滴入0.075M KCL溶液，在室溫下處理30分鐘，其中更換低滲液兩次。
(四)去壁 吸干低滲液，用蒸餾水洗一次，滴入2.5％果膠酶和纖維素酶混合液，以全部材料浸沒為度，加蓋，在30℃條件下處理2～5小時，其中將材料瓶輕輕搖動數(shù)次，促使酶反應充分。
(五)后低滲 吸干酶液(將酶液放到另一棕瓶置冰箱內(nèi)保存，可反復使用)，用蒸餾水慢慢洗2次，然后在蒸餾水中靜止10～20分鐘，進行后低滲。
(六)固定 吸干蒸餾水，加入新配制的甲醇 ：冰醋酸(3：1)固定液3毫升。
(七)制片 取根尖1～3個，放在清潔的載片上，加一滴固定液，用鑷子將根尖挾碎，如太干，可再滴一滴固定液再行挾碎，去掉殘渣。
(八)火焰干燥 將載片在酒精燈焰火上微微烘烤。
(九)染色 用10％Giemsa染液染20分鐘，也可用改良苯酚品紅染色液染色。
(十)鏡檢 將載片水洗后稍干，用顯微鏡找出分散好的染色體中期分裂相。