會(huì)員.png)
QQ交談
您所在位置：請(qǐng)輸入產(chǎn)品關(guān)鍵字：
郵編：200431
聯(lián)系人：王小姐
電話：021-56640936
傳真：021-33250231
手機(jī)：13122441390 15900755943
留言：發(fā)送留言
個(gè)性化：www.shifengsj.com
網(wǎng)址：www.shfeng-edu.com
商鋪：http://true-witness.com/st236594/
士鋒生物動(dòng)物細(xì)胞融合
最近更新時(shí)間：2014-8-6
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大小：50.6KB
文件類型：PNG 圖片下載次數(shù)：154次
資料類型：未知文件瀏覽次數(shù)：687次
細(xì)胞融合指的是兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞合并成一個(gè)細(xì)胞的現(xiàn)象，在自然情況下，受精過(guò)程及某些病變組織中的多核細(xì)胞均屬于融合現(xiàn)象。1961年Barski在研究中觀察到組織培養(yǎng)體細(xì)胞融合現(xiàn)象。1962年Okada首先成功地用仙臺(tái)病毒誘導(dǎo)了細(xì)胞融合，此后引起了不少學(xué)者研究細(xì)胞融合地興趣。30多年來(lái)，細(xì)胞融合技術(shù)有了很大進(jìn)步，如在動(dòng)物或植物種內(nèi)或種間的細(xì)胞雜交，甚至在動(dòng)物細(xì)胞和植物細(xì)胞之間的細(xì)胞雜交等方面取得了很多的成果。目前，細(xì)胞融合技術(shù)已經(jīng)成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞工程、細(xì)胞免疫和腫瘤等的重要手段之一。
一、目的與要求
了解細(xì)胞融合的原理及初步掌握的細(xì)胞融合的方法。
二、原理
在人工條件下，只有在某些誘導(dǎo)物（如仙臺(tái)病毒、聚乙二醇等）的誘導(dǎo)下，使親本細(xì)胞膜發(fā)生一定的變化，才能使兩個(gè)或多個(gè)或更多的細(xì)胞融合。細(xì)胞融合過(guò)程，首先是在誘導(dǎo)物的作用下出現(xiàn)細(xì)胞凝集現(xiàn)象。然后，在細(xì)胞粘連處發(fā)生融合，而成為多核細(xì)胞。zui后，經(jīng)有絲分裂，細(xì)胞核進(jìn)行融合，遂形成新的雜種細(xì)胞。
用人工方法誘導(dǎo)的細(xì)胞融合可形成兩種類型的雙核或多核細(xì)胞，由同一親本的細(xì)胞融合形成的細(xì)胞稱之為同核體（homocaryons），由不同親本細(xì)胞融合形成的則稱之為異核體（heterocaryons）。細(xì)胞融合后的多核細(xì)胞大多只能存活一段時(shí)間（約十幾日）就相繼死亡，而只有雙核的異核體才能存活下來(lái)。存活下來(lái)的異核體經(jīng)有絲分裂，染色體合并在一個(gè)細(xì)胞核內(nèi)，形成雜種細(xì)胞。
為便于雜種細(xì)胞的篩選，細(xì)胞融合時(shí)所用的親本細(xì)胞中，其中一個(gè)常選用能在體外增殖但有酶缺陷的細(xì)胞，如缺乏次黃嘌呤鳥便嘌呤核糖基轉(zhuǎn)移酶（HPRT）或核苷激酶（TK）。而另一親本細(xì)胞則選用離體后不能再生增殖的細(xì)胞。將這兩種細(xì)胞進(jìn)行融合后，用HAT培養(yǎng)基培養(yǎng)。后一種親本的未融合細(xì)胞和同核體由于離體后不能生長(zhǎng)而死亡。前一種親本的未融合細(xì)胞和同核本（離體細(xì)胞能在全養(yǎng)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)增殖）由于HAT培養(yǎng)基中所含的氨基喋呤可阻斷其DNA合成的主要途徑，而這種細(xì)胞又因?yàn)槿狈P－RT和TK不能利用培養(yǎng)基中的外源核苷酸原料（次黃嘌呤）而死亡。因而只有經(jīng)過(guò)融合的異核體（雜種細(xì)胞），由于酶的補(bǔ)償作用，能在HAT培養(yǎng)基中生存，從而被篩選出來(lái)。
三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
1、細(xì)胞融合
2、融合細(xì)胞的識(shí)別
四、實(shí)驗(yàn)步驟
（一） 脊椎動(dòng)物細(xì)胞融合
0. 混合兩種親本細(xì)胞
取小鼠腹腔巨噬細(xì)胞或雞紅血球懸液1ml(107細(xì)胞/ml),IB-RS-2細(xì)胞1ml(106細(xì)胞/ml)注入5ml具塞尖底離心管中，混和兩種親本細(xì)胞后，取出混和液0.2ml，用生理鹽水稀釋5倍，作對(duì)照。