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士鋒生物細胞融合（Cell fusion）實驗
最近更新時間：2014-8-13
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大?。?/span>50.6KB
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實 驗 原 理
兩個或兩個以上的細胞合并成一個雙核或多核細胞的現(xiàn)象稱為細胞融合，也稱細胞雜交，在自然情況下的受精過程即屬這種現(xiàn)象。
誘導細胞融合的主要方法有：病毒誘導融合，化學融合劑誘導融合和電融合。
1. 病毒誘導融合：有許多種類的病毒能介導細胞融合，zui常用的是滅活的仙臺病毒（HVJ），為RNA病毒。病毒誘導細胞融合的過程有：首先是細胞表面吸附許多病毒粒子，接著細胞發(fā)生凝集，幾分鐘至幾十分鐘后，病毒粒子從細胞表面消失，而就在這個部位鄰接的細胞的細胞膜融合，胞漿相互交流，zui后形成融合細胞。
2. 化學融合劑誘導融合：化學融合劑主要有脂肪酸衍生物、脂質體、鈣離子、水溶性高分子化合物、水溶性蛋白質和多肽，其中zui常用的是聚已二醇（PEG）。PEG用于細胞融合至少有兩方面的作用：①可促使細胞凝結；②破壞互相接觸處的細胞膜的磷脂雙分子層，從而使相互接觸的細胞膜之間發(fā)生融合，進而細胞質溝通，形成一個打的雙核或多核融合細胞。
3. 電融合：是指細胞在電場中極化成偶極子，并沿著電力線排列成串，然后用高強度、短時程的電脈沖擊穿細胞膜而導致細胞融合。
細胞融合技術在基因定位、基因表達產物、腫瘤診斷核治療、生物新品種培育及單克隆抗體技術等領域有著非常廣泛的應用前景。單克隆抗體技術就是通過細胞融合技術發(fā)展起來的，在生命科學研究核應用方面產生了重大影響。
實 驗 操 作
在公雞翼下靜脈抽取2ml雞血，加入盛有8ml的Alsever液中，使血液與Alsever液的的比例達1∶4，混勻后可在冰箱中存放一周；
取此儲存雞血0.2ml加入0.8ml的0.85％生理鹽水，充分混勻，1500r/min離心5min，棄去上清，加入1ml的0.85％生理鹽水，重復上述條件離心兩次。zui后棄去上清，加GKN液0.8ml，離心；
棄去上清，加入0.3ml的GKN溶液，制成細胞懸液；（也可以用血球計數板計數，用GKN液將其調整為106個/ml）；
取以上細胞懸液0.2ml放入1ml的EP管中，然后放入37℃水浴中預熱，同時將50％PEG液一并預熱20min；
20min后將0.2ml的50％PEG溶液逐滴沿離心管壁加入到0.2ml細胞懸液中，邊加邊搖勻，然后放入37℃水浴中保溫20min；
20min后，加入GKN溶液1ml，靜止于水浴中20min左右；
1500r/min離心5min，棄去上清，加GKN溶液再離心1次；
棄去上清，加入GKN液少許，混勻，取少量懸浮于載玻片上，加入詹納斯綠染液，用牙簽混勻，3min蓋上蓋玻片，觀察細胞融合情況。
融 合 過 程
細胞融合(Cell fusion)實驗
相關實驗溶液的配制
Alsever溶液：葡萄糖2.05g，檸檬酸鈉0.80g，NaCl 0.42g，溶于100ml雙蒸水中。
GKN溶液：NaCl 8g，KCl 0.4g，Na2HPO4·2H2O 1.77g，NaH2PO4·H2O 0.69g，葡萄糖2g，酚紅0.01g，溶于1000ml水中。
50％PEG溶液：稱取一定量的PEG（WM＝4000）放入燒杯中，沸水浴加熱，使之熔化，待冷卻至50℃時，加入等體積預熱至50℃的GKN溶液，混勻，置37備用。