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肝細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)
最近更新時(shí)間：2014-9-1
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取新鮮肝臟，先剝除被膜和血管等纖維成分，用刀或剪刀把肝臟剪成1mm3左右的小塊，采用帖壁培養(yǎng)法。
初代消化法培養(yǎng)：
1．把肝組織切成2～4立方毫米的小塊，用不含鈣鎂的BSS液洗兩次。
2．移入1：1的0.1％胰蛋白酶和0.1％膠原酶（都用無(wú)鈣鎂BSS配置）中，4℃冷消化10～12小時(shí)后，通過(guò)250微米和64微米尼龍網(wǎng)或不銹鋼紗網(wǎng)濾過(guò)。
3．收集細(xì)胞、BSS液洗1～2次、計(jì)數(shù)、接種培養(yǎng)。
消化培養(yǎng)肝細(xì)胞的另一種方法是灌流法；肝臟灌流需用全肝，以較小動(dòng)物如小鼠和大鼠為好。
1．無(wú)菌解剖動(dòng)物，取出肝臟，先用BSS洗除血污。
2．取5ml注射器一支，吸取消化液后，把注射器頭輕輕插入肝管中，用線繩結(jié)扎牢固，以防消化液漏出，輕輕把消化液注入肝管系統(tǒng)，并不時(shí)輕揉壓肝臟，以便消化液進(jìn)入肝小葉中；消化液在肝內(nèi)停留20～30分后，在吸出消化液的同時(shí)并輕揉壓肝臟，以使肝細(xì)胞脫落和消化液吸出。
3．待吸凈消化液后，注入離心管中，低速離心分離，用RPMI 1640培養(yǎng)基培養(yǎng)（較其它培養(yǎng)基為好），能獲得較純的肝上皮細(xì)胞和獲較好的效果。
傳代培養(yǎng)：
待細(xì)胞生長(zhǎng)連接成片后，用BSS洗一二次，加1：1的0.025％胰蛋白酶和0.02％ EDTA混合消化3～5分鐘，待細(xì)胞回縮，便停止消化，棄掉消化液，用BSS洗一二次，注入營(yíng)養(yǎng)液，吹打，制成細(xì)胞懸液，再接種培養(yǎng)。