會(huì)員.png)
QQ交談
您所在位置：請(qǐng)輸入產(chǎn)品關(guān)鍵字：
郵編：200431
聯(lián)系人：王小姐
電話：021-56640936
傳真：021-33250231
手機(jī)：13122441390 15900755943
留言：發(fā)送留言
個(gè)性化：www.shifengsj.com
網(wǎng)址：www.shfeng-edu.com
商鋪：http://true-witness.com/st236594/
時(shí)間分辯熒光分析法
最近更新時(shí)間：2014-9-2
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大?。?/span>50.6KB
文件類型：PNG 圖片下載次數(shù)：345次
資料類型：未知文件瀏覽次數(shù)：1073次
1）銪熒光檢測(cè)法
標(biāo)記靶細(xì)胞
1．EuCl3的制備：稱取58.08mg Eu2O3，用少量1N HCl攪拌至溶解，再用1N NaOH調(diào)節(jié)pH至4.0。加雙蒸水配成33～100mmol/L的保存液，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
2．用預(yù)冷的標(biāo)記液將靶細(xì)胞濃度調(diào)整到5×106/ml，加50μl 10mg/ml硫酸葡聚糖，置冰浴中20分鐘，其間搖晃數(shù)次。
3．加入30μl 100mmol/L CaCl2溶液終止反應(yīng)5分鐘。
4．用含2mmol/L CaCl2的RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞5次。用含10％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液將靶細(xì)胞配成5×104/ml。
檢測(cè)方法
1．在96孔圓底細(xì)胞培養(yǎng)板中加入靶細(xì)胞懸液，每孔加100μl。
2．向各孔加100μl效應(yīng)細(xì)胞，效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞的比例根據(jù)要求而定，通常為5：1～20：1。自然釋放孔不加效應(yīng)細(xì)胞只加100μl培養(yǎng)液，zui大釋放孔中加100μl 0.5％ Triton X-100。每個(gè)實(shí)驗(yàn)置三個(gè)復(fù)孔。
3．置37℃ 5％ CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3小時(shí)。
4．從每孔吸出20μl上清液，對(duì)應(yīng)加入另一塊96孔酶標(biāo)板中，向第二塊板每孔加200μl增強(qiáng)液。室溫中混合5分鐘。在時(shí)間分辯熒光分析儀上測(cè)定各孔的熒光強(qiáng)度。同時(shí)做EuCl3的標(biāo)準(zhǔn)曲線：用0.05mol/L pH7.0檸檬酸緩沖液配制10倍梯度
5．特異性殺傷活性計(jì)算：殺傷活性（％）＝