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細胞介導細胞毒作用檢測法
最近更新時間：2014-9-9
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大小：50.6KB
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1．用含10％小牛血清和抗生素的RPMI-1640培養(yǎng)液將K562細胞配成1×105/ml濃度。用同樣培養(yǎng)液將PBMC配成1×106/ml濃度。
2．取96孔圓底細胞培養(yǎng)板，每孔加0.1ml K562細胞懸液；每孔加適量PBMC使效靶比為1：1～5：1，每種處理3個復孔；3個對照孔只加效應細胞；8個對照孔只加靶細胞；4個對照孔只加細胞培養(yǎng)液。每孔加20μl Alamar Blue；每孔總量為0.2ml。
3．在37℃ 5％ CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。
4．直接在熒光檢測儀上檢測熒光強度，激發(fā)波長530nm，發(fā)射波長590nm。各孔熒光強度值應減去培養(yǎng)液對照熒光強度的平均值，各復孔熒光強度的平均值記為AF。按下式計算特異性殺傷百分比：
特異性殺傷（％）＝100×