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葡萄糖 -6- 磷酸酶 組織化學(xué) 染色法
最近更新時(shí)間：2015-3-3
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葡萄糖-6-磷酸酶 (glucose-6―phosphatase，G-6―P)定位于肝、腎、腸黏膜的微體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)。主要有兩方面的生理功能：一方面通過水解葡萄糖-6-磷酸釋放葡萄糖來控制葡萄糖釋放人血的量；另一方面，在一定條件下通過其磷酸轉(zhuǎn)移酶活性合成葡萄糖-6-磷酸。糖尿病患者血糖濃度增高的同時(shí)，伴有葡萄糖-6-磷酸酶 的磷酸轉(zhuǎn)移酶活性增高，其作用是取代肝內(nèi)的葡萄糖激酶，使葡萄糖轉(zhuǎn)向糖原合成。
鉛法：葡萄糖-6-磷酸水解后所釋放出磷酸，為*所捕獲，經(jīng)硫化銨處理，zui終反應(yīng)產(chǎn)物為顆粒狀的硫化鉛沉淀。反應(yīng)通式如下：
葡萄糖―6―磷酸鈉+H2 O 葡萄糖 -6- 磷酸酶 葡萄糖+磷酸 Pb(NO3 )2 Pb3 (PO4 )2 (NH4 )2 S PbS↓
1)孵育液配制(新鮮配制)
0．125％葡萄糖―6―磷酸鈉 4ml
0．2mol/LTris-順丁烯二酸鹽緩沖液(pH 7．4) 4ml
2％Ph(N03 )2 (2．5％) 0.6ml
蒸餾水 1．4ml
充分混合后使用
2)染色程序：
①新鮮組織冰凍切片；
②10％福爾馬林固定5分鐘后水洗；
③切片入孵育液中，37℃孵育20分鐘水洗；
④人1％硫化銨水溶液中1分鐘水沖洗；
⑤3％福爾馬林后固定10分鐘；
⑥甘油明膠封固。
3)結(jié)果：酶活性處顯棕色。
4)對(duì)照實(shí)驗(yàn)：①除去底物；②以F―甘油磷酸鈉代替底物；③以0．01mol/L氟化鈉作為抑制劑。