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免疫電泳實驗
最近更新時間：2015-5-13
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大小：50.6KB
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免疫電泳（immunoelectrophoresis ）是將電泳和瓊脂擴散結合起來，用于分析抗原組成的一種定型方法，具有靈敏快速的優(yōu)點。該實驗可分為如下兩個步驟：
1.電泳 將待檢的可溶性物質(zhì)在瓊脂板上進行電泳分離。由于各種可溶性蛋白分子的大小、質(zhì)量與所帶電荷不同，在電場的作用下，其帶電分子的運動速度具有一定的規(guī)律，因此通過電泳能夠把混合物中的各種不同成分分離開。
2.瓊脂擴散 電泳后在瓊脂槽中加入相應抗血清，然后置濕盒內(nèi)進行雙擴散。當抗原與抗體相遇且比例適合時，可形成不溶性復合物，出現(xiàn)特異性沉淀線，根據(jù)沉淀線的數(shù)量和位置，可鑒定分析各種抗原成分及其性質(zhì)。
【材料】
1.抗原：正常人血清；抗體：兔抗人血清。
2.1% 離子瓊脂（用離子強度 0.05 、pH8.6 的巴比妥緩沖液配制）。
3.載玻片、直徑 3mm 的打孔器、2 × 6 × 6 聚苯乙烯塑料條、微量加樣器、電泳儀、吸管等。
【方法】
1.制瓊脂板 載玻片放于水平臺面上，將塑料條放置于玻片中央，吸取 4ml 熱熔的 1% 離子
瓊脂于其上，待凝固后，取出塑料條，即制成瓊脂槽。再按圖 6-2 打孔。
2.加樣 用微量加樣器往孔中加正常人血清。
3.電泳 電壓 4V/cm ，電泳 1.5 小時。
4.瓊脂擴散 在瓊脂槽內(nèi)加入兔抗人血清，使其充滿槽內(nèi)，置濕盒內(nèi) 3 7 ℃ 擴散 24 小時，觀察結果。
【結果觀察】
在瓊脂槽的兩邊出現(xiàn)相對稱的弧形沉淀線。
【注意事項】
1.電泳擴散后可直接在黑色背景下，用斜射光觀察。
2.電泳時，搭橋應*緊密接觸，以免因電流不均而發(fā)生沉淀線彎曲。
【作業(yè)】
1.繪瓊脂板上弧形沉淀線圖。
2.為什么免疫電泳法比免疫瓊脂雙向擴散法靈敏？