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目的DNA片段的回收
最近更新時(shí)間：2015-11-17
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在構(gòu)建重組DNA分子時(shí)，為了提高重組效率，載體DNA的酶切片段，特別是兩種酶切的載體DNA片段、目的基因酶切的DNA片段等，都需要在酶切后進(jìn)一步分離、純化與回收。另外在檢測重組DNA的分子雜交技術(shù)中，要制備DNA探針，也往往涉及要先分離回收DNA片段。
【操作】
1.酶切之后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,泳畢后在紫外燈下檢查目的片段所在位置,并將其凝膠塊切下,將凝膠條置于"V"字槽內(nèi)負(fù)貯膠室中。
2．將0.5*TBE溶液倒入DNA回收槽內(nèi),并用長針頭向"V"槽管內(nèi)加滿TBE溶液,然后再用長針頭向"V"槽管底加入50～100μl高鹽洗脫液。
3．在電泳裝置中灌入0.5*TBE溶液恰好與置膠室中凝膠表面相平,注意不要使TBE溢過中央隔板。
4.接通電源,100V電源洗脫60分鐘,(可看見溴酚藍(lán)全部跑進(jìn)"V"槽內(nèi))用紫外燈檢查凝膠條中DNA條帶是否*洗脫。
5.放出電泳裝置中的TBE溶液,(注意:TBE溶液應(yīng)底于"V"槽口)先用微量加樣器吸出"V"字槽TBE溶液,然后吸出下層含溴酚藍(lán)的高鹽洗脫液移至1.5ml小離心管中,加入1倍體積不含rna酶的TE溶液沖洗"V"槽,合并兩次液體。
6.加入2倍體積冰冷無水乙醇,放置5分鐘,15000rpm離心5分鐘。
7.棄上清,向沉淀中加70%乙醇洗滌,扣干。
8.真空冷凍干燥15分鐘,加入1*TE液溶解。