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植物總DNA的提取及瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)
最近更新時(shí)間:2016-5-11
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核酸的存在形式:
脫氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)
與蛋白質(zhì)結(jié)合在一起以核蛋白(DNP)的形式存在。在制備核酸時(shí)通常破壞細(xì)胞壁及細(xì)胞膜來使核蛋白釋放出來。
植物總DNA包括細(xì)胞核DNA和細(xì)胞核外DNA,前者存在于細(xì)胞核內(nèi),后者存在于細(xì)胞質(zhì)中有半自主性復(fù)制活性的細(xì)胞器內(nèi),例如線粒體DNA(mtDNA)和葉綠體DNA(ctDNA)。
核酸的理化性質(zhì):
DNA為白色類似石棉樣的纖維狀物, RNA的純品呈白色粉末或結(jié)晶。核酸和核苷酸大都呈酸味。
DNA、RNA和核苷酸都是極性化合物,一般都溶于水,不溶于乙醇、氯仿等有機(jī)溶劑,它們的鈉鹽比游離酸易溶于水。
在酸性溶液中,核酸易水解,中性或弱堿性溶液中較穩(wěn)定。
基本過程:
細(xì)胞破碎→抽提去蛋白質(zhì) →沉淀核酸
植物總DNA的提取及瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)
細(xì)胞破碎:
①機(jī)械方法:超聲波處理法、研磨法、勻漿法;
②化學(xué)試劑法:用SDS處理細(xì)胞;
③酶解法: 加入溶菌酶或蝸牛酶,破壞細(xì)胞壁。
DNA提?。?br />1.SDS法 SDS是有效的陰離子去垢劑, 細(xì)胞中DNA與蛋白質(zhì)之間 常借靜電引力或配位鍵結(jié)合, SDS能夠破壞這種價(jià)鍵。
2.CTAB法 CTAB是一種陽離子去垢劑,它可以溶解膜與脂膜,使細(xì)胞中的DNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物釋放出來,并使蛋白質(zhì)變性,使DNA與蛋白質(zhì)分離。