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細胞生長的ATP檢測
最近更新時間：2016-10-31
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大小：14.3KB
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1．ATP反應液（Bio-Orbit）是粉末狀混合物，含有熒光素、熒光素酶、0.5mmol醋酸鎂、50mg BSA和0.1μmol無機焦磷酸。在4℃可以保存1個月。用前用10ml含2mmol/L EDTA的0.1mol/L pH7.75 Tris-醋酸緩沖液稀釋。稀釋液分裝后可在－20℃長期保存。
2．在已經(jīng)完成促增殖或抑生長試驗后的96孔細胞培養(yǎng)板中（每孔含100μl細胞培養(yǎng)液），每孔加0.1ml ATP釋放因子，室溫中反應5分鐘。取另一塊96孔細胞培養(yǎng)板，從*塊板的各孔中吸0.1ml細胞溶解物到第二塊板的相應各孔。
3．在低于25℃中，將第二塊板置自動多孔熒光檢測儀中。用自動加樣器，每孔加入20μl atp反應液，立即檢測10秒鐘的熒光強度。溫度升高，檢測敏感性就下降。
4．用RLU（Y軸）對細胞因子標準品的稀釋度（X軸）作標準曲線，根據(jù)標準曲線確定待測樣品中細胞因子的含量。