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免疫熒光樣品制備與觀察
最近更新時(shí)間：2016-11-13
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一、原理
（一）什么是熒光，簡(jiǎn)單地講，當(dāng)用一定波長(zhǎng)的光（如紫外光）照射某種物質(zhì)時(shí)，經(jīng)過(guò)照射的物質(zhì)在極短時(shí)間內(nèi)即可發(fā)射出一種可見(jiàn)的光，這種光即為熒光。
在生物中，由于產(chǎn)生熒光的方式不同，可以概括地歸納為以下幾種：
1．自發(fā)熒光：在生物的某些組織中，經(jīng)紫外線照射后能直接發(fā)射出熒光的稱為自發(fā)熒光（或直接熒光）。如植物組織中的葉綠素，經(jīng)紫外線照射后，即可發(fā)出紅色熒光。
2．次生熒光：有些生物組織經(jīng)紫外線照射后，并不能發(fā)出熒光，但是當(dāng)它吸收熒光染料后也可以產(chǎn)生熒光，這種稱為次生熒光（或間接熒光）。如吖啶橙，DAPI均可檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的核酸。
3．免疫熒光：這種染色法是利用抗原與抗體反應(yīng)的原理，將熒光染料與抗體結(jié)合，然后，將這種標(biāo)記熒光染料的抗體再與相應(yīng)抗原結(jié)合，即形成抗原、抗體復(fù)合物。經(jīng)一定波長(zhǎng)的光激發(fā)后，即可發(fā)射出熒光，以此辨認(rèn)抗原在組織細(xì)胞內(nèi)的分布狀況。這種方法被稱為免疫熒光（或熒光抗體法）。
組織和細(xì)胞中所產(chǎn)生的熒光，須借助熒光顯微鏡方可進(jìn)行觀察，本實(shí)驗(yàn)是用普通顯微鏡配以一種輕便的熒光光源觀察熒光現(xiàn)象。
免疫熒光樣品制備與觀察（二）輕便落射光裝置
落射光裝置的組成：此裝置是為普通顯微鏡配套設(shè)計(jì)的。它是由兩部分組成，一為光源；另一為落射光系統(tǒng)，如圖，落射光系統(tǒng)由激發(fā)濾片組成。當(dāng)光線通過(guò)激發(fā)濾片到達(dá)二向分光鏡時(shí)，使激發(fā)光反射，經(jīng)物鏡后，激發(fā)標(biāo)本，標(biāo)本輻射熒光，又通過(guò)物鏡，分光鏡而到達(dá)目鏡，以供觀察者觀察及記錄。
二、目的與要求
初步了解生物熒光及熒光染色法，學(xué)習(xí)幾種生物熒光標(biāo)本的制作與觀察。
三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
（一）生物自發(fā)熒光的觀察
（二）生物的熒光染色法
（三）熒光抗體法
四、實(shí)驗(yàn)步驟
（一）生物自發(fā)熒光的觀察
1. 制片
（1）取一干凈載玻片
（2）用吸管吸取眼蟲培養(yǎng)物，滴于載玻片的中央位置。
（3）用鑷子取一張蓋玻片，沿液體的邊緣輕輕的蓋上蓋玻片。