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上海士鋒生物關(guān)于解旋酶結(jié)構(gòu)域助酶漫步DNA的研究

點(diǎn)擊次數(shù):1333 發(fā)布時(shí)間:2013-4-29

 

解旋酶(Helicase)是一類分布廣泛的三磷酸腺苷酶(ATP酶, ATPase),在基因組代謝中具起著廣泛的作用。這項(xiàng)研究報(bào)道了一個(gè)先前研究中被忽視的帶有解旋酶類似結(jié)構(gòu)域的ATP酶的功能,也就是說(shuō),ATP水解可以激活A(yù)TP依賴的長(zhǎng)距離的蛋白質(zhì)在DNA上的一維擴(kuò)散。特別的是,使用單分子熒光顯微鏡觀察,可以看到III類限制性內(nèi)切酶EcoP15I可以使用它的ATP水解酶來(lái)將自身轉(zhuǎn)變成一個(gè)不同結(jié)構(gòu)的狀態(tài),然后使其在DNA上長(zhǎng)時(shí)間長(zhǎng)距離地?cái)U(kuò)散。這個(gè)轉(zhuǎn)化只在結(jié)合到特定的靶位點(diǎn)時(shí)候發(fā)生,且需要消耗約30個(gè)ATP分子。研究人員確定了這些酶的機(jī)制并展示了ATP酶活動(dòng)如何參與DNA靶位點(diǎn)確認(rèn)和一維信號(hào)傳導(dǎo),從而參與如核苷酸切除修復(fù)和錯(cuò)配修復(fù)等DNA常見(jiàn)的代謝過(guò)程。

The Helicase-Like Domains of Type III Restriction Enzymes Trigger Long-Range Diffusion Along DNA

Friedrich W. Schwarz, Júlia Tóth, Kara van Aelst, Guanshen Cui, Sylvia Clausing, Mark D. Szczelkun, Ralf Seidel

Helicases are ubiquitous adenosine triphosphatases (ATPases) with widespread roles in genome metabolism. Here, we report a previously undescribed functionality for ATPases with helicase-like domains; namely, that ATP hydrolysis can trigger ATP-independent long-range protein diffusion on DNA in one dimension (1D). Specifically, using single-molecule fluorescence microscopy we show that the Type III restriction enzyme EcoP15I uses its ATPase to switch into a distinct structural state that diffuses on DNA over long distances and long times. The switching occurs only upon binding to the target site and requires hydrolysis of ~30 ATPs. We define the mechanism for these enzymes and show how ATPase activity is involved in DNA target site verification and 1D signaling, roles that are common in DNA metabolism: for example, in nucleotide excision and mismatch repair.

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