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士鋒生物包埋前免疫納米金單重染色與免疫酶染色結(jié)合的染色實(shí)驗(yàn)
點(diǎn)擊次數(shù)：664 發(fā)布時(shí)間：2013-8-2
免疫納米金染色與免疫膠體金―銀法染色基本相似，也可分為包埋前染色和包埋后染色。下面分別介紹包埋前免疫納米金單重染色和與免疫酶染色結(jié)合的雙重染色基本程序：
包埋前免疫，納米金單重染色按以下步驟進(jìn)行免疫染色：
1. 含1%正常血清或1%BSA的PBS預(yù)孵育20～30分鐘;
2. 特異性*抗體4℃孵育24～48小時(shí)后PBS漂洗3次，每次10分鐘;
3. 納米金標(biāo)記IgGFab，片段（1：100，Nanoprobes）室溫孵育2小時(shí)或4℃孵育12小時(shí)后PBS漂洗3次，每次10分鐘，PB漂洗2次，每次10分鐘;
4. PB配制的1%戊二醛固定30分鐘～2小時(shí)，隨后PB漂洗2次，每次10分鐘;
5. 4℃下銀加強(qiáng)漂洗緩沖液漂洗2次，每次10分鐘;
6. 4℃下銀加強(qiáng)10―15分鐘（避光）;
7. 4℃下定影液中定影10分鐘后PB漂洗2次，每次10分鐘;
8. PB配制1%鋨酸后固定30―60分鐘;PB漂洗2次，每次10分鐘。
9. 按常規(guī)電鏡標(biāo)本制作方法進(jìn)行系列乙醇或丙酮脫水、包埋、超薄切片、電子染色和電鏡觀察。
免疫納米金染色法電鏡圖
環(huán)氧樹脂包埋前免疫納米金染色示亨廷頓蛋白相關(guān)蛋白（huntingtin-associated protein 1.HAP1）在小鼠腦內(nèi)神經(jīng)元軸突終末內(nèi)突觸囊淮上的定位（A1―A3，含HAP1的軸突終末：A4,無HAP1的軸突終末;D1和D2，樹突。箭示納米金一銀顆粒）