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士鋒生物甲醛法測(cè)定氨基酸含量實(shí)驗(yàn)介紹
點(diǎn)擊次數(shù)：650 發(fā)布時(shí)間：2013-9-30
一、原理：氨基酸是兩性電解質(zhì)，不能直接通過(guò)酸堿滴定來(lái)計(jì)算其含量。但在常溫下，甲醛能迅速與氨基酸的氨基結(jié)合，生成羥甲基化合物，使上述平衡右移，促使-NH3釋放H+，使溶液的酸度增加，滴定終點(diǎn)移至酚酞的變色域內(nèi)（PH9.0左右）。因此，可用酚酞做指示劑，用標(biāo)準(zhǔn)堿進(jìn)行滴定。
二、材料與試劑
25ml錐形瓶、3ml微量滴定管、吸管
0.1M標(biāo)準(zhǔn)甘氨酸溶液：準(zhǔn)確稱取750ml甘氨酸，溶解后定容至100ml
0.1M氫氧化鈉、酚酞指示劑（0.5%酚酞的50%乙醇溶液）、中性甲醛溶液（在50ml36%-37%分析純甲醛溶液中加入1ml0.1%酚酞乙醇水溶液，用0.1M的氫氧化鈉溶液滴定到微紅，儲(chǔ)于密封的玻璃瓶中。此試劑在臨用前配制。如已放置一段時(shí)間，則使用前需重新中和。
三、操作方法
1、取3個(gè)25ml的錐形瓶，編號(hào)。向第1、2號(hào)瓶?jī)?nèi)各加入2ml0.1M的標(biāo)準(zhǔn)甘氨酸溶液和5ml水混勻。向3號(hào)瓶?jī)?nèi)加7ml水。然后向3個(gè)瓶中各加5滴酚酞指示劑，混勻后各加2ml甲醛溶液，再混勻，分別用0.1M標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液滴定至溶液顯微紅色。
重復(fù)以上實(shí)驗(yàn)2次，記錄每次每瓶消耗標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液的毫升數(shù)。取平均值，計(jì)算甘氨酸氨基氮的回收率。甘氨酸氨基氮回收率=實(shí)際測(cè)得值/加入理論量×100
公式中實(shí)際測(cè)得量為滴定*和二號(hào)瓶耗用的標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液的ml數(shù)的平均值與三號(hào)瓶耗用的標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液的ml之差乘以標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉的摩爾濃度，再乘以14.008。
2ml乘以標(biāo)準(zhǔn)甘氨酸的摩爾濃度再乘以14.008。即為加入理論量的mg數(shù)。
2、取未知濃度的甘氨酸溶液2ml，依上述方法進(jìn)行測(cè)定，平行做幾份，取平均值。計(jì)算每ml甘氨酸溶液中含有氨基氮的mg數(shù)。
氨基氮（mg/ml）=（V末-V對(duì)）×M氫氧化鈉×14.008/2
式中：V末為滴定待測(cè)液耗用標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液的平均值
V對(duì)為滴定對(duì)照液（3號(hào)瓶）耗用標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液的平均值