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士鋒生物克隆/建庫/表達(dá)超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞介紹
點(diǎn)擊次數(shù)：1120 發(fā)布時(shí)間：2013-11-6
Hte 基因型
Hte（轉(zhuǎn)化）基因型是Stratagene開發(fā)的特異性提高大質(zhì)粒、連接DNA的宿主菌基因型，并使細(xì)胞生長加快（當(dāng)天獲得菌落），已經(jīng)成功應(yīng)用于25kb超螺旋DNA和8kb連接DNA的克隆。XL10-Gold®，BL21-Gold，BL21-CodonPlus®，SoloPack® Gold 和96Pack® Gold等系列細(xì)胞都帶有這個(gè)新的性狀。
超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞
Stratagene提供多種>5 x 109 轉(zhuǎn)化子/μg 超螺旋DNA轉(zhuǎn)化效率的化學(xué)法超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞正是克隆獲得大質(zhì)粒、連接DNA克隆和建庫時(shí)zui值得推薦的。
電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
Stratagene的電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞特別耐受電擊處理，方便好用，在DNA材料極珍貴、量少時(shí)，或構(gòu)建有代表性文庫時(shí)，建議采用電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞。ElectroTen-Blue®細(xì)胞是目前商品化的電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞中效率zui高的，達(dá)到>3 x 1010 轉(zhuǎn)化子/μg 超螺旋DNA。此外XL1-Blue，XL1-Blue MRF’，SURE®，ABLE® 和TG1等細(xì) 胞也提供電轉(zhuǎn)化形式感受態(tài)細(xì)胞。
SURE®－克隆不穩(wěn)定DNA
大腸桿菌DNA修復(fù)系統(tǒng)會(huì)針對(duì)重復(fù)序列、二級(jí)結(jié)構(gòu)（如Z-DNA）等真核DNA進(jìn)行重排或刪除修飾。SURE感受態(tài)細(xì)胞針對(duì)uvrC,umuC,SbcC和RecJ等參與修飾的大腸桿菌基因或蛋白進(jìn)行突變，提高了真核來源、不規(guī)則DNA的穩(wěn)定性達(dá)20倍以上，并且適合克隆甲基化DNA。提供化學(xué)和電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞，效率分別達(dá)1x1010 和1x109。
ABLE®－克隆毒性DNA
目的DNA的蛋白產(chǎn)物常常對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性，通常的解決辦法是采用低拷貝質(zhì)粒，或者采用極為嚴(yán)緊的表達(dá)調(diào)控。為了獲得穩(wěn)定的克隆，ABLE細(xì)胞減少ColE來源質(zhì)粒的拷貝數(shù)（如pUC、pBluescript系列載體），以達(dá)到保持相對(duì)較高拷貝數(shù)的同時(shí)使本底表達(dá)對(duì)于細(xì)胞的毒性降至zui低的效果。
MR系列®－克隆甲基化DNA
真核基因組DNA常常因高度甲基化而被大腸桿菌修飾系統(tǒng)切割、刪除，在構(gòu)建文庫時(shí)，由于要對(duì)cDNA進(jìn)行甲基化保護(hù)，某些cDNA克隆也較難完成。采用Stratagene的MR （Minus Restriction）突變刪除了修飾系統(tǒng)的感受態(tài)細(xì)胞，可以構(gòu)建質(zhì)量非常高的cDNA和基因組文庫。這些細(xì)胞包括：用于大質(zhì)?？寺〉腦L10-Gold®超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞，克隆連接DNA、轉(zhuǎn)化效率 目前zui高的ElectroTen-Blue®電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞，單次反應(yīng)包裝的SoloPack® Gold，以及XL2-Blue MRF´ ，XL1-Blue MRF´ Kan（四環(huán)素抗性質(zhì)粒），XL1-Blue MR（沒有F´附加體），克隆有二級(jí)結(jié)構(gòu)的SURE細(xì)胞等。