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士鋒生物實(shí)驗(yàn)中如何進(jìn)行血清總補(bǔ)體溶血活性（CH50）測定
點(diǎn)擊次數(shù)：895 發(fā)布時(shí)間：2014-1-3
綿羊紅細(xì)胞（SRBC），與相應(yīng)抗體（溶血素）結(jié)合后，可激活待檢血清中的補(bǔ)體而導(dǎo)致SRBC溶血。其溶血程度與血清中補(bǔ)體的含量和功能有關(guān)。由于補(bǔ)體含量與溶血程度之間呈正相關(guān)，但不是直線關(guān)系，而呈S曲線關(guān)系，故通常取反應(yīng)曲線中間部位即50％溶血（CH50）為判定終點(diǎn)。由于抗原抗體復(fù)合物激活的是補(bǔ)體的經(jīng)典途徑，C1～9任何一種成分缺陷都可使CH50降低，所以此實(shí)驗(yàn)反映了總補(bǔ)體的活性。
【材料】磷酸緩沖鹽水(pH7.4 PBS)、2%綿羊紅細(xì)胞、溶血素（2單位）、待檢血清、小試管、吸管、37℃水浴箱等。
【方法】
1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
(1)2%血紅素溶液配制: 吸取5m1 2%綿羊紅細(xì)胞懸液加入離心管中，2000rpm離心5分鐘，去除上清，加蒸餾水2.5m1，待羊紅細(xì)胞溶解后，再加1.7%NaCl溶液2.5m1，混勻，即為2%血紅素溶液。
(2)取小試管11支，按表5-1分別加入各成分。
(3)混勻后2000rpm離心5分鐘，取上清用分光光度計(jì)(波長540nm)測光密度值。
(4)以光密度值為縱坐標(biāo)，溶血%為橫坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2、待檢血清測定
（1） 取病人血清0.1ml，加PBS 3.9ml，使成1:40稀釋，混勻后分裝4個(gè)小試管，每管1ml。
（2） 加2單位溶血素，每管lml。
（3） 加2%綿羊紅細(xì)胞，每管lml。
（4） 37℃水浴30分鐘。
（5） 2000rpm離心5分鐘
（6） 取上清液測光密度值（540nm波長）。
表5-1 CH50測定的標(biāo)準(zhǔn)曲線制備
【結(jié)果】
按下法計(jì)算每ml待檢血清中的補(bǔ)體含量 (計(jì)算4管的平均值)。
例: 病人血清稀釋度1:40，測得光密度值為0.48 (平均值)，自標(biāo)準(zhǔn)曲線查出溶血%為60，則: 40:X = 50:60
血清總補(bǔ)體溶血活性（CH50）測定
此結(jié)果主要反映通過經(jīng)典途徑活化的總補(bǔ)體的活性。