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士鋒生物沉淀反應（Precipitation）實驗
點擊次數(shù)：639 發(fā)布時間：2014-1-8
可溶性抗原與相應的抗體混合，在電解質存在的條件下，兩者比例適合，即可有沉淀物出現(xiàn)，叫沉淀反應（Precipitation）.由于沉淀反應抗原多系膠體溶液。沉淀物主要是由抗體蛋白所組成。
為了求得抗原與抗體的適宜比例，保證有足夠的抗體，而且抗原分子小，具有較大的反應面積，因此操作上通常是稀釋抗原，不稀釋抗體。
沉淀反應的種類有環(huán)狀沉淀、絮狀沉淀、莢膜膨脹、瓊脂擴散及免疫電泳等。此外還有放射性同位素標記、酶標記等測定法。
（一）環(huán)狀沉淀反應
當抗原與相應抗體形成一個接觸面時，如二者比例適當，接觸面上可形成一個乳白色的環(huán)狀物即為陽性沉淀反應。
材料：
1.免疫血清：免疫兔抗人血清
2.抗原：人血清
3.小沉淀管、毛細吸管、橡皮頭、生理鹽水。
方法：
1.取小沉淀管2只，以毛細吸管吸取抗人血清約0.2毫升，加入*管，加時注意不能有氣泡。
2.以毛細吸管吸取生理鹽水0.2毫升加入第二管。
3.用毛細吸管吸入血稀釋0.2毫升加入各管，加時應注意使抗原溶液緩緩由管壁流下，輕浮于血清面上，使成一明顯界面，切勿使之相混。
4.置室溫中10—20分鐘，觀察液面有無乳白色沉淀環(huán)，若有則為陽性。
（二）.瓊脂擴散試驗
瓊脂擴散是抗原抗體在凝膠中所呈現(xiàn)的一種沉淀反應。
抗體在含有電解質的瓊脂凝膠中相遇時，便出現(xiàn)可見的白色沉淀線。這種沉淀線是一組抗原抗體的特異性復合物。如果凝膠中有多種不同抗原抗體存在時，便依各自擴散速度的差異，在適當部位形成獨立的沉淀線，因此廣泛地用于抗原成分的分析。瓊脂擴散試驗可根據(jù)抗原抗體反應的方式和特性分為單向免疫擴散、雙向免疫擴散、免疫電泳、對流免疫電泳、單向及雙向火箭電泳試驗。
（1）單向瓊脂擴散試驗
材料：
1．診斷血清（抗體：抗人IgG或IgA免疫血清）
2．待檢血清（抗原）：人血清
3．參考血清：全國統(tǒng)一人血清免疫球蛋白參考血清（批號不同，免疫球蛋白含量不同）。
4．其它：生理鹽水、瓊脂粉、微量進樣器、打孔器、玻璃板、濕盒等。
方法：
1．將適當稀釋（事先滴定）的診斷血清與予溶化的2%瓊脂在60℃水浴預熱數(shù)分鐘后等量混合均勻制成免疫瓊脂板。
2．在免疫瓊脂板上按一定距離（1.2—1.5厘米）打孔，見圖1。沉淀反應（Precipitation）實驗
3．向孔內滴加1：2，1：4，1：8，1：16，1：32稀釋的參考血清及1：10稀釋的待檢血清，每孔10微升，此時加入的抗原液面應與瓊脂板一平，不得外溢。
4．已經(jīng)加樣的免疫瓊脂板置濕盒中37℃溫箱擴散24小時。
5．測定各孔形成的沉淀環(huán)直徑(mm),用參考血清各稀釋度測定值繪出標準曲線，再由標準曲線查出被檢血清中免疫球蛋白的含量。