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士鋒生物植物種子生命力的快速測(cè)定
點(diǎn)擊次數(shù)：584 發(fā)布時(shí)間：2014-3-7
Ⅰ.TTC法
一、原理
TTC（2，3，5－三苯基氯化四氮唑）的氧化態(tài)是無(wú)色的，可被氫還原成不溶性的紅色三苯甲月替（TTF）。應(yīng)用TTC的水溶液浸泡種子，使之滲入種胚的細(xì)胞內(nèi)，如果種胚具有生命力，其中的脫氫酶就可以將TTC作為受氫體使之還原成為三苯甲月替而呈紅色，如果種胚死亡便不能染色，種胚生命力衰退或部分喪失生活力則染色較淺或局部被染色，因此，可以根據(jù)種胚染色的部位或染色的深淺程度來(lái)鑒定種子的生命力。
二、材料、儀器設(shè)備及試劑
（一）材料：水稻、小麥、玉米、棉花、油菜等待測(cè)種子。
（二）儀器設(shè)備：1. 小燒杯；2. 刀片；3. 鑷子；4. 溫箱；
（三）試劑：0.12％～0.5％TTC溶液（TTC可直接溶于水，溶于水后，呈中性，pH7±0.5，不宜久藏，應(yīng)隨用隨配）。
三、實(shí)驗(yàn)步驟
1. 將種子用溫水（約30℃）浸泡2～6h，使種子充分吸脹。
2. 隨機(jī)取種子100粒，水稻種子要去殼，豆類(lèi)種子要去皮，然后沿種胚中央準(zhǔn)確切開(kāi)，取其一半備用。
3. 將準(zhǔn)備好的種子浸于TTC試劑中，于恒溫箱（30～35℃）中保溫30min。
4. 染色結(jié)束后要立即進(jìn)行鑒定，因放久會(huì)褪色。倒出TTC溶液，再用清水將種子沖洗1～2次，觀(guān)察種胚被染色的情況，凡種胚全部或大部分被染成紅色的即為具有生命力的種子。種胚不被染色的為死種子，如果種胚中非關(guān)鍵性部位（如子葉的一部分）被染色，而胚根或胚芽的不染色都屬于不能正常發(fā)芽的種子
Ⅱ.染料染色法
原理
有生命力種子胚細(xì)胞的原生質(zhì)膜具有半透性，有選擇吸收外界物質(zhì)的能力，一般染料不能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，胚部不染色。而喪失生命力的種子，其胚部細(xì)胞原生質(zhì)膜喪失了選擇吸收能力，染料可自由進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)使胚部染色。所以可根據(jù)種子胚部是否被染色來(lái)判斷種子的生命力。
二、材料、設(shè)備及試劑
（一）材料：水稻、玉米、大豆、棉花、小麥及一些樹(shù)木種子。
（二）設(shè)備：1. 小燒杯；2. 刀片；3. 鑷子；（三）試劑：0.02％～0.2％靛紅溶液或5％紅墨水（酸性大紅G）。
三、實(shí)驗(yàn)步驟同TTC法。
Ⅲ.熒光法
一、原理
植物種子中常含有一些能夠在紫外線(xiàn)照射下產(chǎn)生熒光的物質(zhì)如某些黃酮類(lèi)、香豆素類(lèi)、酚類(lèi)物質(zhì)等，在種子衰老過(guò)程中，這些熒光物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和成分往往發(fā)生變化，因而熒光的顏色也相應(yīng)地有所改變；而且這些種子在衰老死亡時(shí)，內(nèi)含熒光物質(zhì)雖然沒(méi)有改變，但由于生命力衰退或已經(jīng)死亡的細(xì)胞原生質(zhì)之透性增加，當(dāng)浸泡種子時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的熒光物質(zhì)很容易外滲。因此，可以根據(jù)前一種情況直接觀(guān)察種胚熒光的方法來(lái)鑒定種子的生命力，或根據(jù)后一種情況通過(guò)觀(guān)察熒光物質(zhì)滲出的多少來(lái)鑒定種子的生命力。
二、材料及設(shè)備
1. 待測(cè)的植物種子；2. 紫外光燈；3. 白紙（不產(chǎn)生熒光的）；4. 刀子；5. 鑷子；6. 培養(yǎng)皿；7. 燒杯。
三、實(shí)驗(yàn)步驟
（1）直接觀(guān)察法 這種方法適用于禾谷類(lèi)、松柏類(lèi)及某些薔薇科果樹(shù)的種子生命力的鑒定，但種間的差異較大。用刀片沿種子的中心線(xiàn)將種子切為兩半，使其切面向上放在無(wú)熒光的白紙上，置于紫外光燈下照射并進(jìn)行觀(guān)察、記載。有生命力的種子在紫外光的照射下將產(chǎn)生明亮的藍(lán)色、藍(lán)紫色或藍(lán)綠色的熒光；喪失生命力的死種子在紫外光照射下多呈黃色、褐色以至暗淡無(wú)光，并帶有多種斑點(diǎn)。隨機(jī)選取20粒待測(cè)種子按上述方法進(jìn)行觀(guān)察并記載有生命力及喪失生命力的種子的數(shù)目，然后計(jì)算有生命力種子所占百分?jǐn)?shù)。與此同時(shí)也作一平行的常規(guī)發(fā)芽試驗(yàn)，計(jì)算其發(fā)芽率作為對(duì)照。
（2）紙上熒光 隨機(jī)選取50粒完整無(wú)損的種子置燒杯內(nèi)加蒸餾水浸泡10～15min令種子吸脹，然后將種子瀝干，再按0.5cm的距離擺放在濕濾紙上（濾紙上水分不宜過(guò)多，防止熒光物質(zhì)流散）以培養(yǎng)皿覆蓋靜置數(shù)h后將濾紙（或連同上面擺放的種子）風(fēng)干（或用電吹風(fēng)吹干）。置紫外光燈下照射，可以看到擺過(guò)死種子的周?chē)幸蝗γ髁恋臒晒鈭F(tuán)，而具有生命力的種子周?chē)鷦t無(wú)此現(xiàn)象。根據(jù)濾紙上顯現(xiàn)的熒光團(tuán)的數(shù)目就可以測(cè)出喪失生命力的種子的數(shù)量，并由此計(jì)算出有生命力種子所占的百分率。此外，可與此同時(shí)作一平行的常規(guī)種子萌發(fā)試驗(yàn)計(jì)算其發(fā)芽率作為對(duì)照。這個(gè)方法應(yīng)用于白菜、蘿卜等十字花科植物種子生命力的鑒定上效果很好。但對(duì)于一些在衰老、死亡后減弱或失去熒光的種子便不適用此法，因此，對(duì)它們只宜采用直接察法。