QQ交談
您所在位置：請輸入產(chǎn)品關(guān)鍵字：
郵編：200431
聯(lián)系人：王小姐
電話：021-56640936
傳真：021-33250231
手機(jī)：13122441390 15900755943
留言：發(fā)送留言
個(gè)性化：www.shifengsj.com
網(wǎng)址：www.shfeng-edu.com
商鋪：http://true-witness.com/st236594/
士鋒生物微生物的染色技術(shù)及顯微鏡觀察
點(diǎn)擊次數(shù)：681 發(fā)布時(shí)間：2014-4-8
一、細(xì)菌的簡單染色法 1 目的 1.1 學(xué)習(xí)微生物涂片、染色的基本技術(shù)。 1.2 掌握細(xì)菌的簡單染色法。 1.3 初步認(rèn)識細(xì)菌的形態(tài)特征，鞏固學(xué)習(xí)油鏡的使用方法和無菌操作技術(shù)。 2 原理 細(xì)菌的涂片和染色是微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的一項(xiàng)基本技術(shù)。細(xì)菌的細(xì)胞小而透明，在普通的光學(xué)顯微鏡下不易識別，必須對它們進(jìn)行染色。利用單一染料對細(xì)菌進(jìn)行染色，使經(jīng)染色后的菌體與背景形成明顯的色差，從而能更清楚地觀察到其形態(tài)和結(jié)構(gòu)。此法操作簡便，適用于菌體一般形狀和細(xì)菌排列的觀察。常用堿性染料進(jìn)行簡單染色，這是因?yàn)樵谥行浴A性或弱酸性溶液中，細(xì)菌細(xì)胞通常帶負(fù)電荷，而堿性染料在電離時(shí)，其分子的染色部分帶正電荷，因此堿性染料的染色部分很容易與細(xì)菌結(jié)合使細(xì)菌著色。經(jīng)染色后的細(xì)菌細(xì)胞與背景形成鮮明的對比，在顯微鏡下更易于識別。常用作簡單染色的染料有美藍(lán)、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅等。 當(dāng)細(xì)菌分解糖類產(chǎn)酸使培養(yǎng)基pH下降時(shí)，細(xì)菌所帶正電荷增加，此時(shí)可用伊紅、酸性復(fù)紅或剛果紅等酸性染料染色。 染色前必須固定細(xì)菌。其目的有二：一是殺死細(xì)菌并使菌體粘附于玻片上；二是增加其對染料的親和力。常用的有加熱和化學(xué)固定兩種方法。固定時(shí)盡量維持細(xì)胞原有的形態(tài)。 3 材料 3.1 菌種 枯草芽孢桿菌12～18h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物、金黃色葡萄球菌約24h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物、大腸桿菌24h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物、面包酵母瓊脂斜面培養(yǎng)物。3．2 染色劑 呂氏堿性美藍(lán)染液(或草酸銨結(jié)晶紫染液)，石炭酸復(fù)紅染液。 3.3 儀器或其他用具 顯微鏡，酒精燈，載玻片，接種環(huán)，玻片擱架、雙層瓶(內(nèi)裝香柏油和二甲苯)，擦鏡紙，生理鹽水或蒸餾水等。 4 流程 涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→鏡檢。 5 步驟 5.1 涂片 取兩塊潔凈無油的載玻片，在無菌的條件下各滴一小滴生理鹽水(或蒸溜水)于玻片中央，用接種環(huán)以無菌操作，分別從枯草芽孢桿菌、藤黃微球菌和大腸桿菌斜面上挑取少許菌苔于水滴中，混勻并涂成薄膜。若用菌懸液(或液體培養(yǎng)物)涂片，可用接種環(huán)挑取2～3環(huán)直接涂于載玻片上。注意滴生理鹽水（蒸餾水）和取菌時(shí)不宜過多且涂抹要均勻，不宜過厚。 5.2 干燥 室溫自然干燥。也可以將涂面朝上在酒精燈上方稍微加熱，使其干燥。但切勿離火焰太近，因溫度太高會破壞菌體形態(tài)。5.3 固定 如用加熱干燥，固定與干燥合為一步，方法同干燥。 涂片、干燥和熱固定。5.4 染色 將玻片平放于玻片擱架上，滴加染液1～2滴于涂片上(染液剛好覆蓋涂片薄膜為宜)。呂氏堿性美藍(lán)染色1～2min，石炭酸復(fù)紅(或草酸銨結(jié)晶紫)染色約1min 。 5.5 水洗 傾去染液，用自來水從載玻片一端輕輕沖洗，直至從涂片上流下的水無色為止。水洗時(shí)，不要水流直接沖洗涂面。水流不宜過急、過大，以免涂片薄膜脫落。
5.6 干燥 甩去玻片上的水珠自然干燥、電吹風(fēng)吹干或用吸水紙吸干均可以（注意勿擦去菌體）。 5.7 鏡檢 涂片干后鏡檢。涂片必須*干燥后才能用油鏡觀察。 6 結(jié)果 繪制單染色后觀察到的大腸桿菌和藤黃微球菌的形態(tài)圖。 二、革蘭氏染色法 1 目的 1.1 了解革蘭氏染色法的原理及其在細(xì)菌分類鑒定中的重要性。1.2 學(xué)習(xí)掌握革蘭氏染色技術(shù)，鞏固學(xué)習(xí)光學(xué)顯微鏡油鏡的使用方法。