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士鋒生物氣相色譜法測定乙烯含量
點擊次數(shù)：580 發(fā)布時間：2014-4-14
乙烯（ethylene）是植物內(nèi)源激素之一。以氣體形式存在。準(zhǔn)確測定乙烯釋放量，對認識乙烯在植物抗逆生理、發(fā)育生理、開花生理中的作用有著重要的意義。
一、 原理：氣相色譜具有靈敏度高，穩(wěn)定性好等優(yōu)點。色譜儀中的分離系統(tǒng)包括固定相和流動相。由于固定相和流動相對各種物質(zhì)的吸附或溶解能力不同，因此各種物持的分配系數(shù)（或吸附能力）不一樣。當(dāng)含混合物的待測樣（含乙烯的混合氣）進入固定相以后，不斷通以流動相（通常為N2或H2），待測物不斷地再分配，zui后，依照分配系數(shù)大小順序依次被分離，并進入檢測系統(tǒng)得到檢測。檢測信號的大小反映出物質(zhì)含量的多少，在記錄儀上就呈現(xiàn)色譜圖。要使待測物得到充分的分離，就需要一種合適的固定相。乙烯往往與乙炔、乙烷難以分離，而采用GD×502作為固定相則可有比較滿意的效果。
二、材料、儀器設(shè)備及試劑
（一）材料：水稻幼苗（或蘋果、香蕉等）若干。
（二）儀器設(shè)備：1. 密封裝置為帶空心橡皮塞的三角瓶，或真空干燥器。2. 氣相色譜儀。
（三）試劑：標(biāo)準(zhǔn)乙烯。
三、實驗步驟
1. 將試驗材料進行不同的處理（如離體、傷害、發(fā)芽、黑暗、輻射、冷藏、催熟等），然后置于密封裝置中若干時間。
2. 將色譜儀啟動。啟動步驟如下：（1）檢測儀器各部件是否復(fù)位。若沒有，需復(fù)位。（2）打開流動相（N2），將壓力調(diào)至（5kg/cm2）。然后打開儀器上的N2閥，將流速調(diào)至25m/min（管道1，2一樣）。（3）插上電源，打開儀器上電源開關(guān)。（4）調(diào)節(jié)柱溫至60℃，將進樣口溫度調(diào)至100℃（乙烯為氣體，進樣口溫度不需太高）。（5）打開點火裝置電源及空氣壓縮機開關(guān)、調(diào)節(jié)適當(dāng)?shù)牧砍毯退p（range and attenuation）（關(guān)機時，量程應(yīng)打至1，衰減為∞）。（6）打開鋼瓶氫氣閥，調(diào)壓力為1.0kg/cm2）（兩管道一樣），同時將空氣壓力調(diào)至0.5kg/cm2。打開記錄儀電源，并選擇10mV的輸出電壓和適當(dāng)?shù)淖呒埶俣龋?0nm/min）。（7）點火：空氣和氫氣調(diào)好后，將選擇鍵打到ON位置。按點火鍵10S左右，氫氣既可在燃燒室燃燒，在點火并點著時，可以看到記錄筆向上移動。（8）條件選擇：將選擇鍵打到2，并將空氣壓力調(diào)至1.0kg/cm2，氫氣調(diào)至0.5～0.7kg/cm2之間（兩管道一樣）。待基線穩(wěn)定后即可正式測定。
3. 測定（1）取一定濃度（μl/L，以N2作為稀釋劑），一定量（100～1000μl）的標(biāo)準(zhǔn)乙烯進樣，并注意出峰時間。待乙烯峰至頂端時即為乙烯的保留時間，重復(fù)3～4次，得到平均值。該平均值即作為樣品中乙烯定性的依據(jù)之一。（2）取同樣量的待測樣品，注入色譜柱（進樣）。待樣品峰全部出完后，即可做下一個樣品。（3）定性：A.外標(biāo)法定性：樣品中與標(biāo)準(zhǔn)乙烯保留時間相同的峰，即為樣品乙烯峰。B.內(nèi)標(biāo)法定性：在得到某一樣品的色譜圖后，向該樣品中加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)乙烯進樣，若某峰增高，該峰即為樣品中乙烯峰。4.待得到所有樣品色譜圖后，可關(guān)機，關(guān)機步驟：（1）關(guān)掉氫氣總閥或氮氣總閥。（2）關(guān)掉空氣壓縮機。（3）將量程或衰減復(fù)位，選擇鍵打到OFF。（4）關(guān)掉記錄儀。（5）待H2、N2全部排完后，將所有閥復(fù)位。（6）關(guān)主機電源，并拔下插頭。
四、結(jié)果計算
樣品中乙烯濃度（μl/L）＝樣品峰高×標(biāo)樣濃度/標(biāo)準(zhǔn)峰高
樣品乙烯生成速率（μl/g/h）＝乙烯濃度（μl/L）×容器體積（L）/