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士鋒生物DNA電泳常見(jiàn)問(wèn)題分析
點(diǎn)擊次數(shù)：500 發(fā)布時(shí)間：2014-4-23
1) DNA降解
避免核酸酶污染
2) 電泳緩沖液陳舊
電泳緩沖液多次使用后，離子強(qiáng)度降低，pH值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果。建議經(jīng)常更換電泳緩沖液
3) 所用電泳條件不合適
電泳時(shí)電壓不應(yīng)超過(guò)20V/cm，溫度＜30℃；巨大DNA鏈電泳，溫度應(yīng)＜15℃；核查所用電泳緩沖液是否有足夠的緩沖能力
4) DNA上樣量過(guò)多
減少凝膠中DNA上樣量
5) DNA樣含鹽過(guò)高
電泳前通過(guò)乙醇沉淀去除過(guò)多的鹽
6) 有蛋白污染
電泳前酚抽提去除蛋白
7) DNA變性
電泳前勿加熱，用20mM NaCl緩沖液稀釋DNA
不規(guī)則DNA帶遷移
1) 對(duì)于λ/Hind III片段cos位點(diǎn)復(fù)性
電泳前于65℃加熱DNA 5分鐘，然后在冰上冷卻5分鐘
2) 電泳條件不合適
電泳電壓不超過(guò)20V/cm；溫度＜30℃；經(jīng)常更換電泳緩沖液
3) DNA變性
以20mM NaCl Buffer稀釋DNA，電泳前勿加熱
帶弱或無(wú)DNA帶
1) DNA的上樣量不夠
增加DNA的上樣量；聚丙烯酰胺凝膠電泳比瓊脂糖電泳靈敏度稍高，上樣量可適當(dāng)降低
2) DNA降解
避免DNA的核酸酶污染
3) DNA走出凝膠
縮短電泳時(shí)間，降低電壓，增強(qiáng)凝膠濃度
4) 對(duì)于EB染色的DNA，所用光源不合適
應(yīng)用短波長(zhǎng)（254nm）的紫外光源
DNA帶缺失
1) 小DNA帶走出凝膠
縮短電泳時(shí)間，降低電壓，增強(qiáng)凝膠濃度
2) 分子大小相近的DNA帶不易分辨
增加電泳時(shí)間，核準(zhǔn)正確的凝膠濃度
3) DNA 變性
電泳前請(qǐng)勿高溫加熱DNA鏈，以20mM NaCl Buffer稀釋DNA
4) DNA鏈巨大，常規(guī)凝膠電泳不合適
在脈沖凝膠電泳上分析