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如何進(jìn)行血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（SGPT）的測定
點擊次數(shù)：936 發(fā)布時間：2014-5-19
血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(SGPT)能催化丙氨酸和α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸。丙酮酸在酸性條件下與2，4－二硝基苯肼可縮合生成丙酮酸二硝基苯腙，其在堿性條件下呈現(xiàn)棕紅色，在520nm處有zui大吸收。根據(jù)顏色的深淺，通過比色法可計算出酶活性。GPT在肝臟中含量zui多，當(dāng)某種藥物對肝臟早晨損害或病毒肝炎的急性階段，由于肝細(xì)胞受損， GPT就釋放到血液中，使血清中此酶水平明顯升高。因此測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性可作為診斷肝病的重要指標(biāo)。
【實驗試劑和器材】
（一）試劑
1. 0.1M磷酸鹽緩沖液（pH7.4）
2. 丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液（2μMol/ml）
準(zhǔn)確稱取22mg純凈丙酮酸鈉，用0.1M pH7.4磷酸鹽緩沖液定容至100ml。
3. 谷丙轉(zhuǎn)氨酶底物溶液
準(zhǔn)確稱取α－酮戊二酸29.2mg（2mM）， DL－丙氨酸1.78g（200mM），溶于50ml 0.1M pH7.4磷酸鹽緩沖液中，用20% NaOH調(diào)pH為7.4，然后加以上磷酸鹽緩沖液至100ml，加幾滴氯仿防腐，冰箱保存可放一周。
4. 2，4－二硝基苯肼溶液（1mM）稱取2，4－二硝基苯肼20mg，置于100ml容量瓶中，先用10ml濃鹽酸溶解后，再加水稀釋到刻度。
5. 0.4M氫氧化鈉。
（二）器材
試管及試管架， 0.1、0.5 、1及5ml吸量管，恒溫水浴，722型分光光度計。
【實驗方法】
（一）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制
取6支干燥潔凈的試管，按下表操作：
以吸光度值為縱坐標(biāo)，酶活力單位數(shù)為橫坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
（二）血清SGPT活力測定
取4支干燥潔凈試管，按下表操作：
血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(SGPT)的測定
【注意事項】
1. 在測定SGPT時，應(yīng)事先將底物、血清在37℃水浴中保溫，然后在血清管中加入底物，準(zhǔn)確記時。
2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線上數(shù)值在20~500U是準(zhǔn)確可靠的，超過500U時，需將樣品稀釋。
3. 轉(zhuǎn)氨酶只能作用于α－L－氨基酸，對D－氨基酸無作用。實驗室多用α－DL－氨基酸（較L－氨基酸價廉），若用L－氨基酸，則用量減半。
4. 溶血標(biāo)本不宜使用，因血細(xì)胞中轉(zhuǎn)氨酶活力較高，會影響測定效果。
5. 血清樣品的測定需在顯色后30分鐘內(nèi)完成。