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染色體的標(biāo)本制作及其組型實(shí)驗(yàn)
點(diǎn)擊次數(shù)：1191 發(fā)布時(shí)間：2014-7-31
在真核生物中, 染色體的數(shù)量和形態(tài)具有物種的特異性一直可以作為此物種分類的基本依據(jù)之一。染色體作為遺傳物質(zhì)-DNA的載體, 對生物的遺傳、變異、進(jìn)化和個體發(fā)生, 以及細(xì)胞的增殖和生理過程的平衡控制等都具有十分重要的意義。每一個物種的細(xì)胞一般都有一定數(shù)目、形狀和大小的染色體。將體細(xì)胞核中全部染色體按照其大小、著絲粒位置，以至帶型有序地排列起來，此模式圖象排列即為核型(karyotype)或染色體組型。核型分析均是以中期染色體為標(biāo)準(zhǔn)，對制作出的染色體標(biāo)本進(jìn)行照相以獲得染色體的顯微圖象，并將其剪裁排列即成。華裔學(xué)者莊有興(Joe Hin Tjio)和瑞典學(xué)者A.Levan合作, 利用低滲法研究胎兒肺組織的染色體標(biāo)本制做方法，終于在1956年確定了人類的染色體數(shù)目是46條，而不是前人所主張的48條，這為后來的人類核型研究奠定了基礎(chǔ)。
1.實(shí) 驗(yàn) 目 的
1.1 初步掌握動物骨髓染色體標(biāo)本制備基本過程，了解操作步驟的原理。
1.2了解常用實(shí)驗(yàn)動物染色體的數(shù)目及特點(diǎn)。通過組型實(shí)驗(yàn)，掌握染色體組型的基本方法
2.實(shí) 驗(yàn) 原 理
凡細(xì)胞處于活躍增殖狀態(tài)，或者經(jīng)過各種處理后，細(xì)胞就可進(jìn)入分裂的任何動物組織，均可用于染色體分析。在正常動物體內(nèi)，精巢和骨髓均為是活躍分裂的組織。給動物注射一定劑量的秋水仙堿即可使許多處于分裂的細(xì)胞停滯于中期，然后采用常規(guī)空氣干燥法制備染色體，即可得到大量可分析的染色體標(biāo)本。本方法簡便、可靠，不需要經(jīng)體外培養(yǎng)和無菌操作，易于推廣。骨髓細(xì)胞是用于動物細(xì)胞遺傳學(xué)研究很好的材料。但在取材方面，精巢又比骨髓要簡易一些，故本實(shí)驗(yàn)也選用小鼠的精巢為實(shí)驗(yàn)材料。
對于小鼠精巢染色體標(biāo)本的制作，一般包括以下幾個要點(diǎn):
1. 用一定劑量的秋水仙素破壞紡錘絲的形成，使細(xì)胞分裂停滯在中期, 使中期染色體停留在赤道面處;
2. 用低滲法使將細(xì)胞膨脹, 以至于在滴片時(shí)細(xì)胞被脹破, 使細(xì)胞的染色體鋪展到載玻片上;
3. 空氣干燥法可使使細(xì)胞的染色體在載片上展平, 經(jīng)Giemsa染色后便可觀察到染色體的顯微圖象。
染色體組型又名核型，是指根據(jù)染色體的長度、形態(tài)和著絲粒的位置將中期染色體依照所規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)順序和組次予以系統(tǒng)排列而成的模式圖，它代表了一個個體或物種的染色體特征。進(jìn)行染色體組型主要依據(jù)有以下幾個參數(shù): 1. 相對長度(relative length): 指單個染色體的長度與包括x染色體在內(nèi)的單倍體染色體總長度之比，相對長度=單條染色體的長度/(單倍體常染色體+X染色體)的總長度×100%。2. 臂指數(shù)(arm index): 指染色體長臂與短臂的比率，臂指數(shù)=長臂/短臂。3. 著絲粒指數(shù)(centromere index): 指短臂占整個染色體長度的比率，著絲粒指數(shù)=短臂/整個染色體長度×100%, 該比率決定了著絲粒在染色體中的相對位置。4. 染色體的臂數(shù): 對于端部著絲粒染色體，臂數(shù)為1，其它為2。根據(jù)Levan(1964)所制定的人類染色體標(biāo)準(zhǔn)，臂指數(shù)在1.0~1.7之間的染色體為中央著絲粒染色體，在1.7~3.0之間為亞中央著絲粒染色體，在3.0~7.0間為亞端部著絲粒染色體，大于7.0為端部著絲粒染色體；著絲粒指數(shù)在50.0~37.5之間的染色體為中央著絲粒染色體，在37.5~25.0之間為亞中央著絲粒染色體，在25.0~12.5之間為亞端部著絲粒染色體，小于12.5為端部著絲粒染色體。