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士鋒生物誘變物質(zhì)的微核測(cè)試
點(diǎn)擊次數(shù)：608 發(fā)布時(shí)間：2014-8-14
一、實(shí)驗(yàn)原理
微核（micronuclei）簡(jiǎn)稱(chēng)（MCN）是真核類(lèi)生物細(xì)胞中的一種異常結(jié)構(gòu)，往往是細(xì)胞經(jīng)輻射或化學(xué)藥物的作用而產(chǎn)生的。在細(xì)胞間期，微核呈圓形或橢圓形，游離于主核之外、大小應(yīng)在主核1/3以下。微核的折光率及細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)性質(zhì)和主核一樣，也具合成DNA的能力。一般認(rèn)為微核是由有絲分裂后期喪失著絲粒的斷片產(chǎn)生的。我們科研工作證實(shí)，整條的染色體或好幾條也能形成微核。這些斷片或染色體在細(xì)胞分裂末期被兩個(gè)子細(xì)胞核所排斥便形成了第三個(gè)核塊。已經(jīng)證實(shí)微核率的大小是和用藥的劑量或輻射累積效應(yīng)呈正相關(guān)，這一點(diǎn)和染色體畸變的情況一樣。所以許多人認(rèn)為可用簡(jiǎn)易的間期微核計(jì)數(shù)來(lái)代替繁雜的中期畸變?nèi)旧w計(jì)數(shù)。由于大量新的化合物的合成，原子能應(yīng)用，各種各樣工業(yè)廢物的排出，使人們很需要有一套高度靈敏，技術(shù)簡(jiǎn)單的測(cè)試系統(tǒng)來(lái)監(jiān)視環(huán)境的變化。只有真核類(lèi)的測(cè)試系統(tǒng)更能直接推測(cè)誘變物質(zhì)對(duì)人類(lèi)或其它高等生物的遺傳危害，在這方面，微核測(cè)試是一種比較理想的方法。目前國(guó)內(nèi)外不少部門(mén)已把“微核測(cè)試用于輻射損傷、輻射防護(hù)、化學(xué)誘變劑、新藥試驗(yàn)、染色體遺傳疾病及癌癥前期診斷等各方面。
現(xiàn)有的微核測(cè)試系統(tǒng)多數(shù)是用哺乳動(dòng)物的骨髓細(xì)胞或外周血細(xì)胞。缺點(diǎn)是需要一定培養(yǎng)條件與時(shí)間、細(xì)胞同步化困難、微核率低，一般只在0.2％左右。近年來(lái)，有人采用高等植物花粉孢子利用它們天然的同步性作微核測(cè)試材料，取得良好的效果。其中馬德修用一種原產(chǎn)于美洲的鴨跖草（Tradescantiapaludosa）（一種葉子狹長(zhǎng)形的鴨跖草，目前我國(guó)許多地方已經(jīng)引種），建立四分孢子期微核率計(jì)數(shù)（MCN-in-Tetrad）的測(cè)試系統(tǒng)，是近年來(lái)報(bào)導(dǎo)的較好系統(tǒng)之一。該系統(tǒng)用低劑量的化學(xué)藥物處理或輻射處理，其微核率可達(dá)10％—67％。
二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?nbsp;
1.是了解微核測(cè)定的方法與意義。
2.為尋找新的測(cè)試系統(tǒng)或測(cè)定更多的環(huán)境因素。
三、實(shí)驗(yàn)材料
具有幼嫩花序的鴨跖草（長(zhǎng)在溫室中的鴨跖草都能現(xiàn)蕾開(kāi)花，大田栽培花期也很長(zhǎng)），剪取花序，每種處理重復(fù)3根。
四、實(shí)驗(yàn)器具和藥品
1.培養(yǎng)液：Knop氏培養(yǎng)液：1000ml蒸餾水+磷酸二氫鉀0.25g+硫酸鎂0.25g+硝酸鈣1.00g+硝酸鉀0.25g+微量磷酸鐵。
2.處理液：EMS（甲基磺酸乙酯），由培養(yǎng)液配成，50mmol/L，75mmol/L，100mmol/L，150mmol/L等各種處理濃度。NaN3（疊氮鈉），由培養(yǎng)液配成，0.2mmol/L0.4mmol/L，0.8mmol/L等各種濃度。
DES（硫酸二乙酯）由培養(yǎng)液配成50mmol/L，100mmol/L，150mmol/L等各種濃度。
3.固定液：3甲醇：1冰醋酸
染色：改良?jí)A性品紅液（配法參看實(shí)驗(yàn)二十八）
實(shí)驗(yàn)用具：30ml三角燒瓶，剪刀，鑷子，載玻片，蓋玻片等。