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細胞后的注意事項
點擊次數(shù)：805 發(fā)布時間：2014-11-21
1. 收到細胞株包裹時，請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形，若有請立即通知。細胞株請盡速開始培養(yǎng)，或立即冷凍保存（置于-70 ℃，隔夜后，移到液氮）。
2. 冷凍細胞解凍程序：
2.1. 依據(jù)細胞株數(shù)據(jù)單之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它之成份和比例， 制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細胞均無法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之 血清種類，若因?qū)嶒炐枰?，必須有所不同時，務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成， 確定細胞適應(yīng)后， 方進行所需之實驗。
2.2. FBS （fetal bovine serum，胚牛血清），CS （calf serum，小牛血清）和HS （horse serum，馬血清），對細胞而言差異極大，請務(wù)必依據(jù)細胞株資料單之血清種類培養(yǎng)之。
2.3. 將培養(yǎng)基置于37 ℃ 水槽中回溫，回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之，移入無菌操作臺內(nèi)。取出冷凍管，立即放入37 ℃ 水槽中快速解凍，水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿，否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化后，以70 % ethanol 擦拭冷凍管外部， 移入無菌操作臺內(nèi)。
2.4. 依據(jù)細胞種類和濃度，于無菌操作臺內(nèi)取10 ml 培養(yǎng)基加至T25 或T75 flask中。取出已解凍之細胞懸浮液，緩緩加入T25 或T75 flask 內(nèi)之培養(yǎng)基，混合均勻，放入37 ℃，5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
2.5. 對絕大多數(shù)細胞而言，1 % 以下之冷凍保護劑DMSO，不會對細胞之貼附或活 化有不良影響，不需立刻由解凍細胞中去除， 待第二天確定細胞生長或貼附良 好后再去除即可。惟對極少數(shù)因?qū)MSO 敏感或會造成細胞分化之細胞，需 立即去除DMSO 者， 則可將解凍后之細胞懸浮液放入5 - 10 ml 培養(yǎng)基中，離心300 xg （約1000 rpm），5 分鐘，小心移去上清液，加入適量新鮮培養(yǎng)基，將細胞均勻混合后，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中，再放入37 ℃，5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。收到T25 flask 細胞時，處理方式為：
2.5.1. 于寄送過程中，為避免起泡造成細胞脫落死亡，T25 flask 均加滿培養(yǎng)基。請檢查flask 外觀，并于顯微鏡下觀察細胞生長狀況和有無污染現(xiàn)象，若有任何問題， 不要打開蓋子，請立即通知細胞實驗室。
2.5.2. 將原封之T25 flask 靜置于37 ℃，5 % CO2 培養(yǎng)箱中，使細胞回溫至37 ℃，并讓運送過程中少數(shù)脫落的細胞可再附著生長。隔天后，于無菌操作箱內(nèi)取出flask 內(nèi)之培養(yǎng)基，（取出之培養(yǎng)基可以再使用），僅留約5-10ml 培養(yǎng)基于flask 內(nèi)，依一般培養(yǎng)方式再將細胞置入培養(yǎng)箱中，或細胞已長滿盤， 則將細胞做傳代培養(yǎng)。