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公司動態(tài)
分離細(xì)胞漿和細(xì)胞核蛋白全攻略
點(diǎn)擊次數(shù)：1195 發(fā)布時間：2014-12-15
1、用Buffer A 洗滌
2、500G離心5分鐘
3、用BufferA+B（2：1）裂解細(xì)胞，輕輕混勻，孵育5-10分鐘
4、12000G離心10分鐘（上清：細(xì)胞質(zhì)。沉淀：細(xì)胞核和細(xì)胞膜）
5、PBD洗滌細(xì)胞兩次，12000 G離心10分鐘
6、Buffer C裂解細(xì)胞膜（放入液氮中快速冷凍，在冰上融化10分鐘）
7、12000G離心10分鐘（上清：細(xì)胞核。沉淀：細(xì)胞膜）
8、用PBS洗滌
9、用PRPA Buffer在冰上放置30分鐘
10、12000 G離心10分鐘（上清：細(xì)胞膜）
BufferA：10 mmol/L Hepes 7.5；10 mmol/L kcl；1.5 mmol/L Mgcl2；0.5 mmol/LDTT；1 mmol/LNaF；1 mmol/L glycerol phosphate；1 prptease inhibitor cocktail tablet/50ml
BufferB：BufferA+0.15% of Nonidet P-40；
BufferC：20 mmol/L Hepes 7.5；420 mmol/L Nacl；1.5 mmol/L Mgcl2；0.5 mmol/LDTT；1 mmol/LNaF；1 mmol/L glycerol phosphate；1 prptease inhibitor cocktail tablet/50ml