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醋酸纖維素薄膜電泳
點(diǎn)擊次數(shù)：581 發(fā)布時(shí)間：2015-3-17
醋酸纖維素薄膜是由醋酸纖維素加工制成的。醋酸纖維素薄膜作為是電泳支持體有以下優(yōu)點(diǎn)：①電泳后區(qū)帶界限清晰；②通電時(shí)間較短（二十分鐘至一小時(shí)）；③它對(duì)各種蛋白質(zhì)（包括血清白蛋白，溶菌酶及核糖核酸酶）都幾乎*不吸附，因此無拖尾現(xiàn)象；④對(duì)染料也沒有吸附，因此不結(jié)合的染料能*洗掉，無樣品處幾乎*無色。它的電滲作用雖高但很均一，不影響樣品的分離效果，由于醋酸纖維素薄膜吸水量較低，因此必需在密閉的容器中進(jìn)行電泳，并使用較低有電流避免蒸發(fā)。
醋酸纖維素薄膜電泳已經(jīng)廣泛用于血清蛋白，血紅蛋白，球蛋白，脂蛋白，糖蛋白，甲胎蛋白，類固醇及同工酶等的分離分析中，盡管它的分辨力比聚丙酰胺凝膠電泳低，但它具有簡(jiǎn)單，快速等優(yōu)點(diǎn)。根據(jù)樣品理化性質(zhì)，從提高電泳速度和分辨力出發(fā)選擇緩沖液的種類，pH和離子強(qiáng)度。選擇好的緩沖液是揮發(fā)性強(qiáng)，對(duì)顯色或紫外光等觀察區(qū)帶沒有影響，若樣品含鹽量較高時(shí)，宜采用含鹽緩沖液。例如血清蛋白電泳可選用pH8.6的巴比妥緩沖液或硼酸緩沖液；氨基酸的分離則可選用pH7.2的磷酸鹽緩沖液等。電泳時(shí)先將濾膜剪成一定長(zhǎng)度和寬度的紙條。在欲點(diǎn)樣的位置用鉛筆做上記號(hào)，點(diǎn)上樣品，在一定的電壓，電流下電泳一定時(shí)間，取下濾膜，進(jìn)行染色。不同物質(zhì)需采用不同的顯色方法，如核苷酸等物質(zhì)可在紫外分析燈下觀察定位，但許多物質(zhì)必須經(jīng)染色劑顯色。
醋酸纖維素薄膜電泳染色后區(qū)帶可剪下，溶于一定的溶劑中進(jìn)行光密度測(cè)定。也可以浸于折射率為1.474的油中或其他透明液中使之透明，然后直接用光密度計(jì)測(cè)定。它的缺點(diǎn)是厚度小，樣品用量很小，不適于制備。