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Ettan DIGE熒光差異蛋
點(diǎn)擊次數(shù)：532 發(fā)布時(shí)間：2015-4-24
原理和應(yīng)用：
Ettan DIGE熒光差異蛋白表達(dá)分析系統(tǒng)在傳統(tǒng)雙向電泳技術(shù)的基礎(chǔ)上，結(jié)合了多重?zé)晒夥治龅姆椒?，在同一塊膠上共同分離多個(gè)分別由不同熒光標(biāo)記的樣品，并*次引入了內(nèi)標(biāo)的概念，極
大地提高了結(jié)果的準(zhǔn)確性，可靠性和重復(fù)性。在DIGE技術(shù)中，每個(gè)蛋白點(diǎn)都有它自己的內(nèi)標(biāo)，并且軟件全自動(dòng)根據(jù)每個(gè)蛋白點(diǎn)的內(nèi)標(biāo)對(duì)其表達(dá)量進(jìn)行校準(zhǔn)，保證所檢測(cè)到的蛋白豐度變化是真實(shí)的。DIGE技術(shù)可檢測(cè)到樣品間小于10%的蛋白表達(dá)差異，統(tǒng)計(jì)學(xué)可信度達(dá)到95%以上。利用Ettan DIGE技術(shù)還可以對(duì)微量（少到5μg）樣本進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析，例如激光捕獲顯微切割（LCM）得到的樣品或者很難獲得的珍貴樣品等。
Ettan DIGE系統(tǒng)包括CyDye DIGE熒光標(biāo)記物，IPGphor II/Ettan DALT電泳系統(tǒng)，Typhoon多功能激光共聚焦掃描儀和DeCyder差異分析軟件。CyDye DIGE熒光標(biāo)記物專門為Ettan DIGE系統(tǒng)設(shè)計(jì)，這些熒光標(biāo)記物是分子量和電荷匹配的，具有信號(hào)強(qiáng)，光譜分開，吸收和發(fā)射峰窄等特點(diǎn)。這些特點(diǎn)使不同的CyDye（Cy2,Cy3,Cy5）標(biāo)記的樣品可以在同一塊膠上共分離，保證所有樣品在*相同的*向和第二向電泳條件下分離，消除實(shí)驗(yàn)的偏差并保證的膠內(nèi)匹配。利用IPGphor II進(jìn)行*向分離和Ettan DALT垂直電泳儀進(jìn)行第二向分離，在一塊2-D膠上同時(shí)分離多達(dá)3個(gè)樣品。Typhoon的光學(xué)系統(tǒng)經(jīng)過優(yōu)化，在Ettan DIGE系統(tǒng)的CyDye DIGE熒光標(biāo)記蛋白成像中能達(dá)到高靈敏度，并且其控制軟件經(jīng)過優(yōu)化設(shè)計(jì)采集Ettan DIGE圖像。全自動(dòng)多色熒光掃描功能可以一次檢測(cè)多個(gè)樣品并做到四色熒光一次成像，既保證了分析準(zhǔn)確性又提高了通量。另外，Typhoon除了能檢測(cè)范圍廣泛的熒光素外，還有經(jīng)過驗(yàn)證的磷屏同位素檢測(cè)和直接化學(xué)發(fā)光成像功能。特別開發(fā)的軟件DeCyder*自動(dòng)化進(jìn)行DIGE結(jié)果的多重樣品間的差異比較，并通過內(nèi)標(biāo)對(duì)每個(gè)蛋白點(diǎn)和每個(gè)差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。該軟件全自動(dòng)定位和分析在一塊膠中的多重樣品，并進(jìn)行多塊膠之間的比較分析，得到的蛋白豐度差異變化的計(jì)算結(jié)果。利用DeCyder軟件可以得到統(tǒng)計(jì)學(xué)可信的結(jié)果，極大降低操作者之間的偏差，并且將手工操作時(shí)間減少到幾分鐘。
采用DIGE技術(shù)，通過對(duì)不同類型，不同個(gè)體的細(xì)胞、組織、或經(jīng)過不同處理和不同生長條件下蛋白質(zhì)表達(dá)差異分析，在研究疾病的分子機(jī)理、分子診斷、藥物作用機(jī)理、毒理學(xué)等方面都有廣泛的應(yīng)用。尤其是通過對(duì)各種疾病組織和正常組織進(jìn)行比較，可以得到針對(duì)特定疾?。ɡ缒[瘤）的一些標(biāo)記蛋白質(zhì)，得到的這些蛋白質(zhì)可以用來作為疾病分子診斷的標(biāo)記，或?yàn)檫M(jìn)一步的疾病治療以及藥物開發(fā)提供有價(jià)值的信息。
Ettan DIGE是目前蛋白質(zhì)組學(xué)研究中可信度和準(zhǔn)確率zui高的技術(shù)之一，是已經(jīng)經(jīng)過驗(yàn)證并且被許多的蛋白質(zhì)組學(xué)研究部門肯定的技術(shù)。Ettan DIGE技術(shù)已經(jīng)在各種樣品中得到應(yīng)用，包括人、大鼠、小鼠、真菌、細(xì)菌等，主要用于功能蛋白質(zhì)組學(xué)，如各種腫瘤研究，尋找疾病分子標(biāo)志物，揭示藥物作用的分子機(jī)制或毒理學(xué)研究等方面。