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蛋白質(zhì)提取的方法總匯
點(diǎn)擊次數(shù)：616 發(fā)布時(shí)間：2015-4-27
一、植物組織蛋白質(zhì)提取方法
1、根據(jù)樣品重量（1g樣品加入3.5ml提取液，可根據(jù)材料不同適當(dāng)加入），準(zhǔn)備提取液放在冰上。
2、把樣品放在研缽中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上靜置（3～4小時(shí)）。
3、用離心機(jī)離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃。
4、提取上清夜，樣品制備完成。
蛋白質(zhì)提取液：300ml
1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml
2、甘油（Glycerol）75ml
3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g
這種方法針對(duì)SDS-PAGE，垂直板電泳！
二、植物組織蛋白質(zhì)提取方法
三氯醋酸-丙酮沉淀法
1、在液氮中研磨葉片。
2、加入樣品體積3倍的提取液在-20℃的條件下，然后離心（4℃8000rpm以上1小時(shí)）棄上清。
3、加入等體積的冰浴丙酮（含0.07%的β-巰基乙醇），搖勻后離心（4℃8000rpm以上1小時(shí)），然后真空干燥沉淀，備用。
4、上樣前加入裂解液，室溫放置30分鐘，使蛋白充分溶于裂解液中，然后離心（15℃8000rpm以上1小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間以沒有沉淀為標(biāo)準(zhǔn)），可臨時(shí)保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分裝放入-80℃備用。
藥品：
提取液：含10%TCA和0.07%的β-巰基乙醇的丙酮
裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml滅菌的去離子水中（終體積為5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
這種方法針對(duì)雙向電泳，雜質(zhì)少，離子濃度小的特點(diǎn)！當(dāng)然單向電泳也同樣適用，只是電泳的條帶會(huì)減少！
三、組織：腸黏膜
目的：WESTERN BLOT檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)
應(yīng)用TRIPURE提取蛋白質(zhì)步驟：
含蛋白質(zhì)上清液中加入異丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）
倒轉(zhuǎn)混勻，置室溫10min
離心：12000g，10min，4度，棄上清
加入0.3M鹽酸胍/95%乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）
振蕩，置室溫20min
離心：7500g，5 min，4度，棄上清
重復(fù)0.3M鹽酸胍/95%乙醇步2次
沉淀中加入100%乙醇 2ml
充分振蕩混勻，置室溫20min
離心：7500g，5min，4度，棄上清吹干沉淀
1%SDS溶解沉淀
離心：10000g，10min，4度
取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）