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血清總蛋白質的測定方法
點擊次數(shù)：560 發(fā)布時間：2015-5-19
1、凱氏定氮法仍然是建立各個具體方法時采用的參考標準方法。
2、雙縮脲比色法是目前首先推薦的蛋白質定量方法。方法操作簡便，雖然雙縮脲試劑有大同不異。其中酒石酸鉀納可以穩(wěn)定在堿性溶液中的銅離子，含有碘化物作為抗氧化劑。雙縮脲反應生成的復合物其吸收峰為540nm?？刹捎?的標準牛血清白蛋白作為標準品，經(jīng)稱量，必要時用凱氏定氮法標定。各地質控中心提供的混合標準血清可作為第二參考，血清用量100μl，在10-120g/L濃度范圍內呈良好線性關系，批內CV值<2%，其它常用的方法還有：
3、基于蛋白分子中含有酪氨酸和色氨酸而使用的酚試劑比色法由于各種蛋白質分子中上述兩種氨基酸的組成比例不同，特別是白蛋白含色氨酸為0.2%，而γ-球蛋白中含量達2%-3%，導致較大的差異。Lowry的改良法在酚試劑中加入Cu2++，集中原法和雙縮脲反應兩者的作用，使呈色靈敏度提高。其中75%的呈色依賴于Cu2++。反應產(chǎn)物*吸收峰在650-750nm，方法靈敏度為雙縮脲方法的100倍左右。有利于檢測較微量的蛋白質。但試劑反應仍易受多種化合物的干擾。
4、采用280nm和215/225紫外吸收值，計算蛋白質含量 280nm 是由于蛋白質分子中存在芳香族氨基酸所致。方法的特異性和準確性受蛋白分子中該種氨基酸的含量比例影響甚大。尿酸和肝紅素在280nm附近有干擾。紫外區(qū)200-225nm是肽健的強吸收峰。在此區(qū)域其吸收值為280nm的10-30倍，將血清稀釋1000-2000倍可以消除干擾物質的影響。
5、采用沉淀反應進行散射比濁法 用磺柳酸、三氯醋酸等配方，此方法甚為簡便，不需特殊儀器，技術關鍵在于：①選擇*試劑濃度及溫度；②混勻技術；③選用的標準；④待測標本中的蛋白濃度。
6、染料結合法 蛋白質可與某些染料特異結合，如氨基黑（amino black）與考馬亮藍（comassive brilliant blue ）。這一性質除了可以用于電泳后的蛋白質區(qū)帶染色，亦可用于總蛋白質的定量。缺點是多種蛋白質與染料的結合力不一致?？捡R亮藍在與蛋白質結合后的吸收峰從465nm移向595nm，這一性質可用分光光度法來定量檢測。