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公司動(dòng)態(tài)
硝酸銀染色
點(diǎn)擊次數(shù)：570 發(fā)布時(shí)間：2015-5-29
由于銀染的靈敏度很高，可染出膠上低于 1 ng/蛋白質(zhì)點(diǎn)，故廣泛的用在 2D 凝膠分析上。待找到自己感興趣的蛋白質(zhì)點(diǎn)后，再通過考染富集該目的點(diǎn)，然后做進(jìn)一步的肽段指紋圖譜分析（PMF）或序列測定。隨著質(zhì)譜技術(shù)的不斷完善和發(fā)展，對(duì)銀染后的 f mol 級(jí)的蛋白質(zhì)點(diǎn)直接測定已非難事。這里介紹一種可兼容質(zhì)譜分析的銀染方法，實(shí)驗(yàn)程序如下：
| Step | Solution (250ml per gel) | Gel Type | |
|---|---|---|---|
| 固定 | 25ml acetic acid, 100ml methanol 125ml milli-Q water | 1mm unbacked 2x15 min | 1mm on film or glass support or 1.5 unbacked 2x60 min |
| 敏化 | 75ml methanol, 0.5g Na2SO3, 17g NaAc, milli-Q water to 250ml | 30 min | 60 min |
| 漂洗 | 250ml milli-Q water | 3x5 min | 5x8 min |
| 銀染 | 0.625g AgNO3, milli-Q water to 250ml | 20 min | 60 min |
| 漂洗 | 250ml milli-Q water | 2x1 min | 4x1 min |
| 顯色 | 6.25g Na2CO3 , 100μ formaldehyde, milli-Q water to 250ml | 4 min | 6 min |
| 終止 | 3.65g EDTA, milli-Q water to 250 ml | 10 min | 40 min |
| 漂洗 | 250ml milli-Q water | 3x5 min | 2x30 min |
銀染注意事項(xiàng)：
1. 很多銀染程序都使用了戊二醛（glutardialdehyde），它能提高銀染的靈敏度和染色結(jié)果的重復(fù)性，但是因?yàn)槲於?huì)修飾蛋白質(zhì)，從而會(huì)影響對(duì)蛋白質(zhì)點(diǎn)的質(zhì)譜鑒定和分析；
2. 保證所有的染色器皿的干凈，可使用玻璃或塑料做染色器皿；
3. 水的純度對(duì)染色結(jié)果好壞影響是很大的，至少要用雙蒸水（導(dǎo)電率<2μS），有條件的可使用 Millipore water；
4. 染色過程中避免手去接觸凝膠，必須戴上一次性手套或無粉乳膠手套；
5. 所用的化學(xué)試劑一定是要分析純 （ AR ）。