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iTRAQ蛋白質(zhì)定量與生物標志物發(fā)現(xiàn)技術(shù)平臺
點擊次數(shù)：1183 發(fā)布時間：2015-7-2
定量蛋白質(zhì)組學是蛋白質(zhì)研究的前沿學科。目前常用的定量蛋白質(zhì)組學研究技術(shù)有熒光差異凝膠電泳（DIGE）、同位素親和標記（ICAT）等。同位素標記相對和定量（iTRAQ）技術(shù)是近年來開發(fā)的一種新的蛋白質(zhì)組學定量研究技術(shù)。結(jié)合非凝膠串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，該技術(shù)可對復雜樣本、細胞器、細胞裂解液等樣本進行相對和定量研究，具有較好的定量效果、較高的重復性，并可對多達8種不同樣本同時進行定量分析。
蛋白質(zhì)組學的研究非常復雜，僅僅知道蛋白質(zhì)的身份并不足以zui終確定蛋白質(zhì)，因為蛋白質(zhì)的濃度對于實現(xiàn)其在細胞中的功能來說極其重要，一種特殊蛋白質(zhì)在濃度上的變化，就能預示細胞的突變過程。因此，科學家能夠?qū)Φ鞍踪|(zhì)的相對和濃度進行測量，是很重要的事情。過去，科學家通常先進行二維（2D）凝膠電泳，切斷條帶，再用質(zhì)譜方法測量條帶中的蛋白質(zhì)。而采用iTRAQ蛋白質(zhì)定量技術(shù)可以加速蛋白質(zhì)的定量研究，基于高度靈敏性和準確性的串聯(lián)質(zhì)譜方法，不需要凝膠，就可以獲得蛋白質(zhì)相對和的結(jié)果。iTRAQ試劑盒包括8種同量的氨基反應試劑，能對蛋白質(zhì)水解的肽段標記，因此采用串聯(lián)質(zhì)譜方法，可以對肽段進行準確的鑒定和定量。iTRAQ的操作程序非常簡單，既可以直接標記蛋白質(zhì)，也可以將蛋白質(zhì)酶解為肽段，然后用iTRAQ試劑進行差異標記。再將標記物混合，這樣就可以對其進行比較。與樣本結(jié)合后，用2D液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜進行分析。在質(zhì)譜分析鑒定特殊肽離子片段結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上采用Protein Pilot軟件包對每一個肽段進行鑒定。
技術(shù)路線圖：
iTRAQ定量實驗，操作簡便沒有更多煩瑣的額外操作步驟，相對于一般的蛋白質(zhì)組分析流程，iTRAQ定量只增加了簡單的一步，iTRAQ標記，反應效率高、時間短，不會增加工作量。只要掌握了一般的蛋白質(zhì)組學分析技術(shù)，就能完成iTRAQ定量實驗。
主要特點：
1、一次實驗同時定量4或8個樣品，極大提高了通量。
2、技術(shù)路線簡單，不需要額外的煩瑣操作。
3、能夠增強二級碎片離子信號，能產(chǎn)生更好的y離子和b離子系列，二級譜圖質(zhì)量更好。
4、標記所有的肽段，提高了蛋白質(zhì)組的覆蓋率，包括翻譯后修飾，而且提高了鑒定和定量的可信度。
由于iTRAQ定量實驗具有操作簡單、重復性好、定量效果好等特點，所以得到大家的認同和喜愛，并且逐漸成為蛋白質(zhì)組學定量研究技術(shù)的主流。