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重組質(zhì)粒的篩選
點(diǎn)擊次數(shù)：704 發(fā)布時(shí)間：2015-12-21
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貨號(hào) | 品牌 | 包裝 | 庫(kù)存 | 單價(jià) |
Sfk041-0.2ml | Shfeng | 0.2ml | 現(xiàn)貨 | 詢價(jià) |
品牌 | 貨號(hào) | 純度 | 包裝 | 庫(kù)存 | 價(jià)格(RMB) |
Shfeng | C0017-100g | ≥99% | 100g | ≥7 | 170 |
Shfeng | C0017-500g | ≥99% | 500g | ≥6 | 740 |
DR | C12730000 | 進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品帶證書 | 500mg | ≥19 | 360 |
貨號(hào) | 純度 | 包裝 | 庫(kù)存 | 單價(jià) |
A0855-25g | BR | 25g | 現(xiàn)貨 | 240 |
A0855-100g | BR | 100g | 現(xiàn)貨 | 580 |
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貨號(hào) | 純度 | 包裝 | 庫(kù)存 | 單價(jià) |
A0156B-100mg | 標(biāo)準(zhǔn)品,≥98% | 100mg | 現(xiàn)貨 | 180 |
A0156B-25g | AR,≥98% | 25g | 現(xiàn)貨 | 60 |
A0156B-100g | AR,≥98% | 100g | 現(xiàn)貨 | 120 |
A0156B-500g | AR,≥98% | 500g | 現(xiàn)貨 | 390 |
貨號(hào) | 純度 | 包裝 | 庫(kù)存 | 單價(jià) |
B11104-20mg | 標(biāo)準(zhǔn)品,≥98% | 20mg | 3 | 1700 |
B11104-1g | 標(biāo)準(zhǔn)品,≥98% | 1g | 1-2天 | 詢價(jià) |
品牌 | 貨號(hào) | 純度 | 包裝 | 庫(kù)存 | 價(jià)格 |
Shfeng | A1982-5g | HPLC,99% | 5g | 現(xiàn)貨 | 79 |
Shfeng | A1982-25g | HPLC,99% | 25g | 現(xiàn)貨 | 195 |
Shfeng | A1982-100g | HPLC,99% | 100g | 現(xiàn)貨 | 597 |
貨號(hào) | 純度 | 包裝 | 庫(kù)存 | 單價(jià) |
B10519-20mg | 標(biāo)準(zhǔn)品,≥98% | 20mg | 現(xiàn)貨 | 詢價(jià) |
B10519-250mg | 標(biāo)準(zhǔn)品,≥98% | 250mg | 現(xiàn)貨 | 詢價(jià) |
B10519-1g | 標(biāo)準(zhǔn)品,≥98% | 1g | 現(xiàn)貨 | 詢價(jià) |
B10519A-1g | AR,≥95% | 1g | 現(xiàn)貨 | 580 |
B10519A-5g | AR,≥95% | 5g | 現(xiàn)貨 | 1600 |
實(shí)驗(yàn)儀器 控溫?fù)u床 水浴鍋 冰箱（-20,‐70℃） 超凈工作臺(tái) 培養(yǎng)箱
實(shí)驗(yàn)試劑 Amp LB IPTG X-Gal
平皿 玻棒 三角瓶 離心管 移液器 tip
實(shí)驗(yàn)步驟：20人／班 1平皿／人
挑取可疑的白色菌落，移植于2mL的LB中，250轉(zhuǎn)/分搖菌、37℃培養(yǎng)過(guò)。以快速堿法抽提質(zhì)粒：
1.取適量菌液于2ml指形管中，12000rpm/min 離心30s-1min。
2.棄上清，且用濾紙吸干。
3.加溶液I 100μL，重懸菌體（使細(xì)菌重新溶解）。振蕩。
溶液I：含葡萄糖，作用形成粘度和滲透壓。
含EDTA，作用是能絡(luò)合Mg+、Ca ++，抑制DNA酶活性。
含Tris-HCL，作用作為平衡鹽。含溶菌酶，作用是溶解細(xì)胞壁。
4.加溶液II 200μL，反復(fù)倒轉(zhuǎn)輕搖。
溶液II：含NaOH+SDS（現(xiàn)配現(xiàn)用）。作用：使溶液PH值達(dá)到12.4左右，使核酸變性，而質(zhì)粒變性不嚴(yán)重。同時(shí)SDS能使蛋白質(zhì)溶解。
5.加溶液III 150μL，倒轉(zhuǎn)輕搖勻。
溶液III：含KAC、HAC其作用是使溶液PH達(dá)到中性，染色體退火形成網(wǎng)狀，而質(zhì)粒還原成螺旋狀，溶解在水中。
6.12，000r離心5分鐘。
7.轉(zhuǎn)移上清至另一指形管。
8.加等體積平衡酚（PH7.6以上，用Tris-NaOH調(diào)），猛烈搖勻， 12，000r離心5分鐘。
9.小心轉(zhuǎn)移上清至另一指形管。
10.加1/2體積平衡酚和1/2體積氯仿：異丙醇（氯仿：異丙醇為24：1），混勻，12，000r離心5分鐘。
11.重復(fù)9
12.加等體積氯仿：異丙醇抽提，12，000r離心5分鐘。
13.重復(fù)9
14.加1/10體積的3M NaAc（PH5.2）和2.5體積的無(wú)水乙醇，混勻。冰浴若干時(shí)間（時(shí)間可長(zhǎng)可短）。NaAc使質(zhì)粒（帶負(fù)電）電荷減弱，易沉淀。
15.12，000r，15分鐘。
16.棄上清，用75%乙醇1ml洗沉淀。作用：去鹽。
17.離心12，000r，5分鐘。
18.棄上清，風(fēng)干殘留液。
19.加含有RNase的雙蒸水30-50μL，溶解沉淀。
20.室溫作用若干時(shí)間，電泳檢測(cè)或置冰箱結(jié)冰層備用。
結(jié)果與分析:
根據(jù)提取質(zhì)粒酶切后的電泳圖譜, 具體分析是否有插入片段; 有插入片段的為重組子.