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PCR假陰性的原因分析
點擊次數(shù)：647 發(fā)布時間：2016-3-23
PCR的假陽性問題是在PCR誕生之初就被深刻認識到了，同時由于造成假陽性的因素相對單一，因此假陽性并不是困惑檢驗工作的主要原因。如果一個項目只是陽性率高敏感性好的話，那么可以認為其陰性結果具備很高的可排除性，仍然有相當?shù)呐R床適用價值。但PCR的假陰性在檢驗工作中仍很嚴重，并且用些因素經(jīng)常被人忽略，嚴重的影響了PCR的使用?？梢韵胂笠环N假陽性和假陰性都很高的項目，有什么樣的診斷價值。
造成PCR假陰性的原因是復雜的，也是多樣的。主要有：
1.PCR儀本身的質(zhì)量問題。PCR儀設計原理上的差異和經(jīng)常出現(xiàn)的質(zhì)量問題（如：溫控不準等）給臨床帶來了諸如非特異性擴增（假陽性）、擴增效率下降(假陰性）等問題.
2.離心機問題。離心機的質(zhì)量或使用不正確，造成離心標本模板沒有分離出來造成假陰性，竊以為這是zui易被忽視的問題。其時離心機使用問題不僅在PCR，在整個檢驗工作中都是zui易被忽視的問題，只是因為在其他工作中不象PCR那樣明顯影響檢測結果罷了。
離心機是常用的固液分離設備，其利用離心過程中的離心力而將密度不同的物質(zhì)分離出來。因此離心機的關鍵在于離心加速度而不是轉速，根據(jù)牛頓定律可知離心力加速度與轉速和有效半徑的有關的，因此對于不同有效半徑的離心機相同的轉速其離心加速度是不同的，轉速的調(diào)節(jié)要因離心機而異，但很遺憾，日常工作中忽視了這個問題。有效半徑短的離心加速度就小，同樣的時間離心效果就差可能造成分離不出導致假陰性。同時由于高速離心機高速旋轉與空氣摩擦會產(chǎn)生大量的熱，因此對于稱能上幾萬轉/分而沒有抽真空的離心機實際轉速本人持懷疑態(tài)度。
3.試劑開殼劑和操作問題造成標本DNA沒有暴露出來，致使擴增無法進行，這是造成假陰性的又一主要因素