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細(xì)胞培養(yǎng)無(wú)菌操作基本技術(shù)
點(diǎn)擊次數(shù)：616 發(fā)布時(shí)間：2016-10-18
1)實(shí)驗(yàn)前,無(wú)菌室及無(wú)菌操作臺(tái)用紫外燈照射30-60分鐘滅菌,用70% 酒精擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面,并開(kāi)啟無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘后,才可開(kāi)始實(shí)驗(yàn)操作.每次操作只處理一株細(xì)胞,以免造成細(xì)胞交叉污染.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái).如需要繼續(xù)進(jìn)行下一個(gè)實(shí)驗(yàn),則用70% 酒精擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面,再讓無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘后,才可進(jìn)行下一個(gè)實(shí)驗(yàn)操作.
(2)無(wú)菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔與寬敞,必要物品,如試管架,移液器或吸管頭等可以暫時(shí)放置,其它實(shí)驗(yàn)用品用完后應(yīng)及時(shí)移出,以利氣體流通.實(shí)驗(yàn)用品要用70%酒精擦拭后才能帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi).實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在操作臺(tái)中央無(wú)菌區(qū)域內(nèi)進(jìn)行,勿在邊緣非無(wú)菌區(qū)域操作.
(3)小心取出無(wú)菌實(shí)驗(yàn)用品,避免造成污染.切勿碰觸吸管與吸頭頭部或容器瓶口,不要在打開(kāi)的容器正上方操作實(shí)驗(yàn).容器打開(kāi)后,用手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45°角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放在臺(tái)面上.
(4)工作人員應(yīng)注意自身的安全,必須穿戴實(shí)驗(yàn)衣與手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn).對(duì)于來(lái)自人源性或病毒感染的細(xì)胞株應(yīng)特別小心,并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)的無(wú)菌操作臺(tái)(至少兩級(jí)).操作過(guò)程中,應(yīng)避免引起氣溶膠的產(chǎn)生,小心有毒性試劑,例如DMSO及TPA等,并避免尖銳物品傷人等.
(5)定期檢查下列項(xiàng)目:CO2鋼瓶?jī)?nèi)的CO2壓力;CO2培養(yǎng)箱內(nèi)的CO2濃度,溫度,及水盤是否有污染;無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)氣流壓力是否正常,定期更換紫外燈管及HEPA過(guò)濾器濾膜,預(yù)濾網(wǎng)（300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng),3000小時(shí)/HEPA）.