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染色體Ｃ帶技術(shù)
點(diǎn)擊次數(shù)：668 發(fā)布時間：2016-11-3
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?nbsp;
通過實(shí)驗(yàn)，初步掌握動、植物染色體Ｃ帶分帶技術(shù)。
二、實(shí)驗(yàn)原理
Ｃ帶是顯帶技術(shù)中zui簡單的一種帶型。使用這種技術(shù)，能使著絲粒型的異染色質(zhì)著色，這種異染色質(zhì)通常位于著絲粒周圍并常含有高度重復(fù)序列的DNA。因?yàn)橥ǔ６荚谥z粒處出現(xiàn)，所以稱之為C-帶。
關(guān)于產(chǎn)生Ｃ帶的機(jī)理，有人認(rèn)為用氫氧化鋇和鹽類處理染色體，能從染色體中提取高達(dá)80％的DNA。DNA被優(yōu)先地從非Ｃ帶區(qū)提出，結(jié)果染色體臂著色淺而著絲粒異染色質(zhì)著色深。有人研究表明，著絲粒異染色質(zhì)僅與組蛋白結(jié)合，而常染色質(zhì)含有大量非組蛋白蛋白質(zhì)。一般有這樣的看法，活躍的染色質(zhì)比遺傳上不活躍的染色質(zhì)更富以非組蛋白蛋白質(zhì)。這說明，僅與組蛋白結(jié)合的染色質(zhì)比含有大量非組蛋白蛋白質(zhì)的染色質(zhì)，結(jié)構(gòu)緊密得多。也就是這種緊密的結(jié)構(gòu)保護(hù)著絲粒的異染色質(zhì)免受氫氧化鋇和鹽類的破壞，從而產(chǎn)生Ｃ帶。
三、實(shí)驗(yàn)材料
小白鼠骨髓細(xì)胞染色體制片不經(jīng)染色留用的標(biāo)本片，或采用酸處理壓片法制備植物根尖細(xì)胞染色體的標(biāo)本片。
四、實(shí)驗(yàn)器具和藥品試劑
顯微鏡、恒溫水浴鍋、分析天平、鑷子、切片架、切片盒、立式染缸、漏斗、量筒、吸管、濾紙等。
鹽酸、氫氧化鋇、Giemsa母液、磷酸緩沖液、2×SSC溶液。
五、實(shí)驗(yàn)方法和步驟
(一) BSG(Barium hydroxide， Saline，Giemsa)法：
將標(biāo)本片浸入新配制的5％Ba(OH)2溶液(60℃)中處理5～10分鐘后，用 60℃熱水慢慢倒入染色缸中，使氫氧化鋇慢慢溢出，直到Ba(OH)2被熱水置換出來，zui后再用熱水漂洗2次，以*洗凈氫氧化鋇。或經(jīng)0.2N HCL 漂洗數(shù)秒，用蒸餾水漂洗干凈。然后在2×SSC溶液（65℃）中溫浴 60～120分鐘。經(jīng)水洗, 稍干后用1/10 Giemsa 染液染色20分鐘。流水洗片，稍干后鏡檢。
(二) HSG(Hyolorochloric acid， Saline， Giemsa)法：
將標(biāo)本片在0.2N HCL中室溫處理60分鐘。蒸餾水沖洗后，置2×SSC溶液(65℃)中溫育15分鐘。經(jīng)蒸餾水沖洗，稍干后用1/10 Giemsa 染液染色 10分鐘左右。水沖洗，稍干后鏡檢。
(三) 注意事項(xiàng)
分帶處理適度的染色體應(yīng)為深紅略帶藍(lán)色,具黑色帶紋。如染色體紅色，無帶，則變性處理不夠，應(yīng)加大Ba(OH)2濃度或加長變性時間；如染色體未染上色，或只著絲點(diǎn)附近染成黑色，則變性過度，應(yīng)降低Ba(OH)2濃度，或減少變性時間；如細(xì)胞核和染色體均不見，說明變性極過度。
蠶豆和洋蔥采用HSG法較好，而大麥和小麥采用BSG法效果較好。
(四) 帶型分析 將已分帶的標(biāo)本，進(jìn)行顯微攝影，沖洗、放大，按核型分析方法將染色體編號進(jìn)行帶型分析，要求詳細(xì)記錄各染色體上，各帶紋的位置，寬窄著色深淺和形狀。zui后繪制染色體模式圖，在各條染色體模式圖上標(biāo)出各條帶紋的位置、寬窄、深淺、形狀等線條。
植物染色體C帶主要包括四種帶型：
1．著絲粒帶 是指著絲粒及其附近的帶，大部分植物都有這種帶型。
2．中間帶 分布于染色體著絲粒至末端之間的帶叫做中間帶。小麥B組染色體中間帶較多且明顯；蠶豆染色體中間帶一般在長臂上。
3．末端帶 位于染色體的末端的帶。洋蔥有較明顯的末端帶，小麥僅部分染色體顯示，大麥、蠶豆則不顯示。
4．核仁縊痕帶 是指核仁染色體特殊的帶型，位于核仁組織中心區(qū)，蠶豆、玉米、大麥、小麥均有明顯的核仁縊痕帶。