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神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)詳細(xì)介紹
點擊次數(shù):535 發(fā)布時間:2016-12-5
神經(jīng)細(xì)胞(神經(jīng)元)不易培養(yǎng),只有在適宜情況下,如接種在膠原底層上,或加入神經(jīng)生長因子和膠質(zhì)細(xì)胞因子時,可出現(xiàn)一定程度的分化,長出突起等現(xiàn)象,但很難使之增值。而神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞是神經(jīng)組織中比較容易培養(yǎng)的成分。
人、鼠等腦組織即可用于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng),不僅能獲得生長的膠質(zhì)細(xì)胞,也可形成能傳代的二倍體細(xì)胞系。一般說來,膠質(zhì)細(xì)胞在培養(yǎng)中生長不穩(wěn)定,不易自發(fā)轉(zhuǎn)化,但對外界因素仍保持很好的敏感性,可用ROUS病毒和SV4等誘發(fā)轉(zhuǎn)化。
一. 設(shè)備: 無菌操作設(shè)備。
二. 大型設(shè)備CO2培養(yǎng)箱:恒溫5%、10%CO2維持培養(yǎng)液中pH值。
倒置顯微鏡:用于每天觀察貼壁細(xì)胞生長情況。
解剖顯微鏡,用于準(zhǔn)確地取材。
常溫冰箱:-4℃,用于保存各種培養(yǎng)液,解剖液和鼠尾膠。
低溫冰箱:-20℃--80℃,用于儲存血清酶,貴重物品和試劑。
電熱干烤箱:用于消毒玻璃器皿。
高壓消毒鍋:用于消毒培養(yǎng)皿,手術(shù)器械。
過濾器:配制解剖液、培養(yǎng)液,必須過濾后才可使用,以去除細(xì)菌。
滲透壓儀,pH劑,天平等。
三. 培養(yǎng)器皿及手術(shù)器械
1 培養(yǎng)皿:常用35mm塑料及玻璃皿,解剖取材用15mm-90mm直徑。
2 培養(yǎng)板,24-40孔,可用于開放培養(yǎng)。
3 培養(yǎng)瓶:
4 吸管,常用1,5,10ml,均需泡酸、洗滌、滅菌后方可使用。
5 各類培養(yǎng)液貯存器。
6 小型手術(shù)器械。
準(zhǔn)備:
一 配制培養(yǎng)液
(1) 解剖液:以無機(jī)鹽(去除Ca2+, Mg2+)加葡萄糖配制成PBS緩沖液,保持一定的滲透壓和pH值。
(2) 基礎(chǔ)培養(yǎng)基(MEM):主要為多種氨基酸,加入葡萄糖,雙蒸餾水溶解。
(3) 接種培養(yǎng)液:用于胰酶消化后的細(xì)胞分散,做成細(xì)胞懸液,其成分為MEM含1%谷氨酰胺,另加入10%馬血清,當(dāng)天配制。
(4) 維持培養(yǎng)液:接種后24h,全部換成此液,后每2周換一次,每次換1/2。其成分為MEM中含5%馬血清,1%谷氨酰胺,及適量的支持性營養(yǎng)物質(zhì)。
二 培養(yǎng)基質(zhì) 常用鼠尾膠、小牛皮膠,多聚賴氨酸,再涂膠
三消毒培養(yǎng)皿的備用。所有培養(yǎng)器皿均需清水沖洗2-3d,達(dá)兩次ddH2O,每遍洗刷3-4次,加塞包裝,置于烤箱中干燥消毒,于培養(yǎng)前1天進(jìn)行。