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細(xì)胞電融合實(shí)驗(yàn)
點(diǎn)擊次數(shù)：850 發(fā)布時(shí)間：2016-12-27
目的要求
使學(xué)生在了解電融合原理的基礎(chǔ)上，學(xué)會(huì)掌握各種細(xì)胞懸液的制備及電融合過程的操作方法。
實(shí)驗(yàn)原理
游離的動(dòng)物細(xì)胞或原生質(zhì)體，置于電融合室中，在高頻交流電場(chǎng)的作用下，細(xì)胞被極化，成為偶極子，造成細(xì)胞之間相互連接，如果施加的高頻交流電壓（既正弦波的P-P值）過高或作用時(shí)間過長(zhǎng)，則細(xì)胞連接成串珠狀，應(yīng)適當(dāng)控制以上條件，盡量是兩細(xì)胞處于點(diǎn)接觸狀態(tài)；然后施加方波脈沖予以刺激，由于電脈沖的瞬間作用，可擊破兩細(xì)胞接觸點(diǎn)部位的質(zhì)膜，此時(shí)質(zhì)膜脂類分子發(fā)生重組，同時(shí)由于細(xì)胞表面的張力作用，使兩細(xì)胞融合逐步完成。
實(shí)驗(yàn)用品
器材：JCF-1型細(xì)胞電融合儀、細(xì)胞融合池、普通離心機(jī)、倒置顯微鏡（或研究用顯微鏡）刻度離心管、刻度吸管、小燒杯（10ml）等。
試劑：甘露醇、蔗糖、氯化鈉等。
材料：雞血。
實(shí)驗(yàn)方法
一、動(dòng)物細(xì)胞的制備
用滅菌的注射器先吸入Alsver液(葡萄糖2.05g，枸櫞酸鈉0.8g，NaCl 0.42g，加重蒸水100ml) 1ml，再?gòu)碾u的翼下靜脈取血0.5～1ml，取出后放入刻度離心管中，再加入2~3ml Alsver液，使總量為4~5ml，混勻并封口，置于4℃冰箱內(nèi)可供一周內(nèi)使用。
二、細(xì)胞電融合
(1) 連接電源線插頭至電源線插座。
(2) 插入融合小室電極至電源線插座，將含有一定密度的動(dòng)物細(xì)胞融合液加入融合小室內(nèi)，將融合小室板放置倒置顯微鏡下，調(diào)正光距至細(xì)胞清晰。
(3) 按下電源開關(guān)。
(4) 用粗、中、細(xì)調(diào)調(diào)節(jié)成串脈沖所需頻率300~400KHz，然后調(diào)節(jié)所需成串脈沖電壓30~40V。
(5) 調(diào)節(jié)融合脈沖脈寬，調(diào)節(jié)融合脈沖所需個(gè)數(shù)，選擇好閘門時(shí)間(一般為“中”)
(6) 調(diào)節(jié)融合脈沖電壓至120~300V。
(7) 同時(shí)按下成串脈沖及融合脈沖開關(guān)，此時(shí)在倒置顯微鏡中可觀察到細(xì)胞移動(dòng)并排列成串狀。
按下脈沖觸發(fā)開關(guān)，可觀察到細(xì)胞被電脈沖擊穿，并與相鄰的細(xì)胞發(fā)生融合。此時(shí)實(shí)驗(yàn)完成。取下融合小室，關(guān)閉電源。