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植物遺傳轉(zhuǎn)化中基因受體的選擇
點(diǎn)擊次數(shù)：1264 發(fā)布時(shí)間：2017-3-6
植物遺傳轉(zhuǎn)化中基因受體通常有體外培養(yǎng)材料和活體材料兩類(lèi)。利用體外培養(yǎng)材料如原生質(zhì)體、懸浮培養(yǎng)細(xì)胞、愈傷組織、小孢子和原初外植體等作為基因受體，即通過(guò)組織培養(yǎng)和植株再生來(lái)實(shí)現(xiàn)遺傳轉(zhuǎn)化，是目前zui主要的方法。此外，使用活體材料如完整植株、種子或花粉等作為基因受體，以及利用花粉管通道法或子房注射法等直接將外源基因?qū)胧荏w植物也取得了成功。影響基因受體選擇的因素包括基因轉(zhuǎn)化方法、受體的再生能力、受體材料的生理狀態(tài)和再生途徑，以及體細(xì)胞無(wú)性系變異的發(fā)生等，其中限制基因轉(zhuǎn)移的首要因素當(dāng)屬受體的再生能力，因?yàn)榻⒏哳l植株再生體系是植物基因轉(zhuǎn)化的一個(gè)重要條件，但是其他因素在不同程度上和以不同方式影響植物基因轉(zhuǎn)化的有效性。本文將對(duì)基因受體選擇需要考慮的幾個(gè)因素加以考察。
1 基因受體的選擇要考慮基因轉(zhuǎn)化方法和受體的再生能力
對(duì)雙子葉植物進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化通常采用根癌農(nóng)桿菌（Agrobacterium tumefaciens）載體系統(tǒng)，利用該載體系統(tǒng)的轉(zhuǎn)化方法包括共培養(yǎng)法（coc*tion）和整株或種子接種共感染法，共培養(yǎng)法中采用受體通常有原生質(zhì)體、懸浮培養(yǎng)細(xì)胞、葉盤(pán)和莖段等其他原初外植體。利用根癌農(nóng)桿菌載體系統(tǒng)具有很多優(yōu)點(diǎn)，并且取得了極大的成功，但是對(duì)于除百合目和天南星目以外絕大多數(shù)單子葉植物，尤其是對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)至關(guān)重要的禾谷類(lèi)作物而言，都不是根癌農(nóng)桿菌的天然寄主，通常不采用這一方法進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，但并非，目前水稻利用此法效果也很好。
利用DNA直接導(dǎo)入法如PEG（polyethylene glycol，聚乙二醇）誘導(dǎo)法、脂質(zhì)體（liposome）介導(dǎo)法、電激法（electroporation）和顯微注射法（microinjection）等雖然沒(méi)有宿主限制，但這些方法的一般采用的受體為原生質(zhì)體，也有少數(shù)采用花粉或小孢子作為受體。絕大多數(shù)植物難以進(jìn)行原生質(zhì)體培養(yǎng)和植株再生，即使有些植物種類(lèi)可以進(jìn)行原生質(zhì)體培養(yǎng)和植株再生，但是基因型專(zhuān)一性也限制了一些在優(yōu)良品種上進(jìn)行遺傳操作。雙子葉植物中大多可以從葉肉組織分離原生質(zhì)體進(jìn)行培養(yǎng)和再生，但單子葉植物很難從葉肉分離原生質(zhì)體進(jìn)行培養(yǎng)，目前只有水稻等可以從葉肉原生質(zhì)體培養(yǎng)獲得再生植株的報(bào)道，而主要是從未成熟胚或小孢子產(chǎn)生的胚性懸浮培養(yǎng)細(xì)胞中分離原生質(zhì)體，而胚性懸浮細(xì)胞在長(zhǎng)期培養(yǎng)過(guò)程中再生能力會(huì)逐漸下降，變異增加，所以來(lái)源并不可靠。另外，原生質(zhì)體培養(yǎng)程序復(fù)雜，再生困難，重復(fù)性和可靠性差，有時(shí)再生植株不育或育性較低也是一個(gè)問(wèn)題。利用電激法和顯微注射法目前有少量報(bào)道可以從器官化的組織材料如小孢子產(chǎn)生的原胚、損傷的未成熟合子胚、體細(xì)胞胚或葉基部上進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移。
微彈轟擊法（microprojectile bombardment, particle bombardment, biolistics）又稱(chēng)基因槍法（particle gun），是除根癌農(nóng)桿菌載體介導(dǎo)法之外的第二種主要的遺傳轉(zhuǎn)化方法，這種方法無(wú)宿主限制，對(duì)單雙子葉植物同樣有效，不存在基因型專(zhuān)一性，也不受培養(yǎng)類(lèi)型的限制，可以對(duì)原生質(zhì)體、懸浮培養(yǎng)細(xì)胞、愈傷組織進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移，也可以對(duì)再生能力較強(qiáng)的成熟和未成熟胚、分生組織、莖尖、花粉細(xì)胞、子房和葉盤(pán)等原初外植體進(jìn)行轉(zhuǎn)化，這對(duì)于單子葉植物如禾谷類(lèi)作物十分重要，因?yàn)檫@可避開(kāi)原生質(zhì)體作為基因受體的限制。目前單子葉植物常用的受體材料主要是從成熟或未成熟胚等獲得的胚性懸浮細(xì)胞和胚性愈傷組織，另外以盾片組織等器官化材料也可作為受體