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微囊藻毒素的測定方法
閱讀：3018 發(fā)布時(shí)間：2020-11-16
下面來講述微囊藻毒素的2種測定方法：
藻細(xì)胞破裂后會(huì)釋放出多種藻毒素。一般認(rèn)為它是由肽合成酶復(fù)合體合成的生物活性小肽，具有環(huán)狀結(jié)構(gòu)及其氨基酸的特殊結(jié)構(gòu)。影響微囊藻毒素合成的環(huán)境因子較多，主要的有光照、溫度、pH值和營養(yǎng)元素等。有研究結(jié)果表明藻毒素是初級(jí)代謝產(chǎn)物，其主要作用是通過鰲合使進(jìn)入藻體內(nèi)的重金屬離子減輕毒性和抑制其它水生植物并促進(jìn)其本身的生長。不同藻毒素的功能還有待深入研究。
1.生物毒理檢測法:生物毒理檢測法包括動(dòng)物毒性法、細(xì)胞毒性法。動(dòng)物毒性法是將純化的微囊藻毒素或水華藍(lán)藻中提取的藻毒素通過動(dòng)物口服或注射來間接評(píng)價(jià)藻毒素的毒性的一t種方法。根據(jù)動(dòng)物的生理病變及半致死劑量(LD50)可初步確定藻毒素的毒性，這也是毒理評(píng)價(jià)的常用方法。除個(gè)別異構(gòu)體的LD50為200~250μg/kg外，多數(shù)微囊藻毒素LD50為60~70μgkg。動(dòng)物毒理檢測法操作簡單，但個(gè)體差別較大，并不能準(zhǔn)確的判定藻毒素類型及結(jié)構(gòu)。因此動(dòng)物毒理檢測法通常只作為毒性檢測的初篩選方法.另外還有利用毒素對(duì)細(xì)胞的毒性作用來檢測的方法是細(xì)胞毒性檢測技術(shù)。這種技術(shù)既可以對(duì)毒素定性分析還可以定量。谷康定等用2步灌流法制備大鼠原代肝細(xì)胞，經(jīng)MC-LR處理后，數(shù)小時(shí)后細(xì)胞形態(tài)學(xué)即發(fā)生改變，其靈敏度可達(dá)μg/L級(jí)。但該技術(shù)操作繁瑣，基本上處于初步研究階段，目前較難大范圍推廣應(yīng)用。
2.化學(xué)分析法:高效液相色譜是目前應(yīng)用廣泛的方法，具有較高的靈敏度和精密度，依據(jù)保留時(shí)間定性，一次可以測定多種藻毒素。高效液相色譜可以分離純化、定性或定量檢測微囊藻毒素。一般是先將樣品通過固相萃取吸附富集，溶劑淋洗后洗脫，用于定性、定量分析。另外可采用色質(zhì)聯(lián)用或與核磁共振聯(lián)用技術(shù)確定藻毒素的分子式和結(jié)構(gòu)。對(duì)于流動(dòng)相，一般采用乙腈/水或甲醇/水體系的不同濃度梯度淋洗，在水相中加入一定比例的三fu乙酸或采用酸性的磷酸鹽緩沖溶液以保持酸性(pH 約2.5)，用C18固相萃取柱.對(duì)藻毒素進(jìn)行分離。藻毒素的種類繁多，很多情況下需要測定水體中總藻毒素的濃度。藻毒素均含有側(cè)鏈ADDA基團(tuán)，而藻毒素的毒性與側(cè)鏈ADDA基團(tuán)密切相關(guān)，ADDA基團(tuán)的大吸收峰在238nm處，所以對(duì)MC的化學(xué)檢測，常采用HPLC/UV法。