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ELISPOT技術的應用與展望

2013-6-30　　閱讀(1265)

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ELISPOT技術的*優(yōu)點已經(jīng)讓它在抗原特異性T細胞免疫學研究上*。它是當今*能夠檢測到到百萬分之一陽性細胞率的檢測技術。如此高的靈敏度就連流式細胞技術（細胞內(nèi)細胞因子染色）和tetramer技術也*（Letsch A et. al.， 2003）。此外由于淋巴細胞的凍存復蘇問題也得到了的解決，經(jīng)過凍存復蘇的細胞并不喪失免疫功能（Maecker HT et. al.， 2005；Kvarnstrom M et. al.， 2004）。這一點對臨床試驗非常重要，它使科研人員得以并行分析免疫治療前、后的病人血樣。如果試驗牽涉全國乃至多個臨床試驗機構，病人血樣可凍存、運輸?shù)降胶诵膶嶒炇覂x器檢測。同理，一個實驗樣品或標準對照品可分裝凍存，運輸?shù)讲煌膶嶒炇覚z測，以資比較。

所以，ELISPOT技術的應用在國外已經(jīng)*普及。凡是需要進行免疫學檢測的地方機會都可以應用該項技術。粗略的劃分可以分為以下幾類：

1、疫苗研究開發(fā)

ELISPOT檢測已經(jīng)成為評價疫苗細胞免疫反應zui有效的指標（Harrop R et. al.， 2004）。我們知道，疫苗的保護效果可以分為兩部分：體液免疫保護和細胞免疫保護。有效的疫苗不僅能夠激發(fā)強烈的體液免疫，也能激發(fā)有效的細胞免疫（Holmgren J et. al.， 1992b）。對于某些持續(xù)性感染的疾病，疫苗的細胞免疫保護效果甚至居于主要地位。zui的例子是艾滋病疫苗開發(fā)（Lee FK et. al.， 1989；Stratov I et. al.， 2004）。由于艾滋病毒的超級突變能力，體液免疫往往會被病毒輕易逃避，體內(nèi)真正控制病毒復制的因素是細胞免疫反應，即清除受感染的CD4+細胞（Vahlne A et. al.， 1991；Maecker HT et. al.， 2003）。除了預防性的疫苗開發(fā)之外，治療性疫苗也是目前疫苗開發(fā)的重要組成部分。治療疫苗的主要功能在于重新激發(fā)起人體內(nèi)被抑制的針對病源細胞免疫反應。目前的治療儀表包括乙肝疫苗、黑色素瘤疫苗（Zarour HM et. al.， 2003）、肝癌疫苗（Chi KH et. al.， 2005）、自身免疫疫苗等等。

2、臨床指導

許多疾病的發(fā)生、發(fā)展都是與人體的免疫系統(tǒng)異常相關聯(lián)的。比如各種自身免疫疾?。篒-型糖尿?。↘arlsson Faresjo MG et. al.， 2005），多發(fā)硬化癥（Moldovan IR et. al.， 2005）、系統(tǒng)性紅斑狼瘡（Kalsi JK et. al.， 2004）、牛皮癬/銀屑?。⊿igmundsdottir H t. al.， 1997）、結核病（Restrepo BI 2004）、自身免疫性心肌炎（Maier R et. al.， 2005）、自身免疫性感音性耳聾（Solares CA et. al.， 2005）、風濕性關節(jié)炎（Klatt T et. al.， 2005）、.視神經(jīng)脊髓炎（Correale J et. al.， 2004）等等。在這些疾病的診斷、病因查找中，ELISPOT檢測可以提供非常重要的信息，甚至成為zui終指標。比如在I-型糖尿病的診斷中，ELISPOT可以提供zui終的判定依據(jù)（Meierhoff G et. al.， 2002）。而對有糖尿病史的家族，做ELISPOT檢測，甚至可以在疾病發(fā)作之前5-10年作出（Karlsson Faresjo MG et. al.， 2005；Seissler J et. al.， 2001）。這對于指導病人的日常生活，提高治療效果有著重要的現(xiàn)實意義。

ELISPOT除了直接用于臨床診斷，還可以對于治療和用藥提供重要的參考信息。比如對于器官移植者，用ELISPOT監(jiān)視患者體內(nèi)的免疫排斥反應，可以有針對性的用藥，避免盲目的使用免疫抑制劑（Tung TH et. al.， 2005）。這對于增加移植手術的成功率，延長移植器官的存活率，提高病人的生活質(zhì)量意義重大（van Besouw NM et. al.， 2005；Tambur AR et. al.， 2005）。類似的ELISPOT免疫監(jiān)視也見于基因治療的病人（Whiteside TL et. al.， 2003）。再比如對于乙肝病人，如果用ELISPOT檢測觀者所處的免疫階段（急性期、平穩(wěn)期、耐受期、恢復期），有針對的用藥，同時評估各種藥物對于觀者的治療效果，遠優(yōu)于盲目治療（Fan ZP et. al.， 2004；Lohr HF et. al.， 1998）。

3、基礎研究

ELISPOT技術本來就是在基礎研究中創(chuàng)立和發(fā)展起來的。生物學和醫(yī)學的基礎研究日新月異，ELISPOT有不可磨滅的功勛。但也正是由于基礎研究的發(fā)展快，ELISPOT的應用廣，所以才難于分門別類?？陀^地說，在一切免疫學研究的前沿領域，ELISPOT都是zui有力的研究工具之一。比如研究人體的免疫系統(tǒng)功能，研究Th0/Th1/Th2細胞轉換分析（Ott PA et. al.， 2005），研究機體的過敏機制（Bordignon V et. al.， 2005；Chapoval SP et. al.， 2002），研究癌癥的免疫機制（Andersen MH et. al.， 2005；Alix-Panabieres C et. al.， 2005），研究和篩選有效的T細胞表位肽（Anthony DD et. al.， 2003）等等等等，可謂名目繁多，不一而足。ELISPOT技術在基礎研究方面所受的限制不在于技術本身，而在于我們的想象能力與創(chuàng)新思維。

展望未來的ELISPOT技術，會在技術進步本身和應用領域擴展兩個方面都有長足的發(fā)展。就技術本身來說，更好的底板材料，無血清檢測技術，雙因子檢測，多因子熒光檢測，都會逐漸成熟起來。ELISPOT應用領域的拓展可以從每年發(fā)表文獻的數(shù)量變化上反映出來。圖顯示了美國國立衛(wèi)生院生物信息中心論文數(shù)據(jù)庫（NCBI PubMed）收錄的自ELISPOT創(chuàng)立以來年度論文的數(shù)目。該圖反映了ELISPOT技術經(jīng)歷起起伏伏，終于發(fā)揚光大，成為免疫學主流檢測技術的歷程。

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